Разработка методики пептидного картирования для оценки подлинности рекомбинантного интерферона бета-1b

Биофармацевтический журнал Pub Date : 2021-02-23 DOI:10.30906/2073-8099-2021-13-1-21-26

Елена Сергеевна Голощапова, А. Минеро, Ольга Б. Рунова, Ольга Борисовна Устинникова

{"title":"Разработка методики пептидного картирования для оценки подлинности рекомбинантного интерферона бета-1b","authors":"Елена Сергеевна Голощапова, А. Минеро, Ольга Б. Рунова, Ольга Борисовна Устинникова","doi":"10.30906/2073-8099-2021-13-1-21-26","DOIUrl":null,"url":null,"abstract":"Подобраны условия ферментативного гидролиза с применением эндопротеиназы Glu-C, рабочая область рН которой соответствовала рН-диапазону стабильности белка. Экспериментально подтверждено отсутствие аутогидролиза фермента. Анализ полученных пептидных карт, основанный на оценке стабильности времен удерживания и интенсивности 7 основных пиков, позволил выбрать их в качестве реперных. Масс-спектрометрический анализ состава фракций, соответствующих данным пикам, позволил идентифицировать 81 аминокислотный остаток, что соответствует 50 % аминокислотного покрытия первичной последовательности исходной молекулы. Разработана методика пептидного картирования с последующим разделением продуктов ферментативного гидролиза методом ВЭЖХ. Полученные результаты свидетельствуют о специфичности и стабильности полученных пептидных карт. Методика может быть использована при подтверждении подлинности структуры рекомбинантного интерферона бета-1b, не содержащего вспомогательных веществ белковой природы.","PeriodicalId":367601,"journal":{"name":"Биофармацевтический журнал","volume":"38 1","pages":"0"},"PeriodicalIF":0.0000,"publicationDate":"2021-02-23","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":"2","resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":null,"PeriodicalName":"Биофармацевтический журнал","FirstCategoryId":"1085","ListUrlMain":"https://doi.org/10.30906/2073-8099-2021-13-1-21-26","RegionNum":0,"RegionCategory":null,"ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":null,"EPubDate":"","PubModel":"","JCR":"","JCRName":"","Score":null,"Total":0}

引用次数: 2

Abstract

Подобраны условия ферментативного гидролиза с применением эндопротеиназы Glu-C, рабочая область рН которой соответствовала рН-диапазону стабильности белка. Экспериментально подтверждено отсутствие аутогидролиза фермента. Анализ полученных пептидных карт, основанный на оценке стабильности времен удерживания и интенсивности 7 основных пиков, позволил выбрать их в качестве реперных. Масс-спектрометрический анализ состава фракций, соответствующих данным пикам, позволил идентифицировать 81 аминокислотный остаток, что соответствует 50 % аминокислотного покрытия первичной последовательности исходной молекулы. Разработана методика пептидного картирования с последующим разделением продуктов ферментативного гидролиза методом ВЭЖХ. Полученные результаты свидетельствуют о специфичности и стабильности полученных пептидных карт. Методика может быть использована при подтверждении подлинности структуры рекомбинантного интерферона бета-1b, не содержащего вспомогательных веществ белковой природы.

查看原文

微信好友朋友圈 QQ好友复制链接

本刊更多论文

开发肽映射技术来评估重组干扰素beta -1b的真实性

酶水解的条件是使用Glu-C内蛋白，其工作区域与蛋白质稳定范围一致。实验证实没有自体水解酶。对所收到的肽卡的分析基于对7个主要峰值的持久性和强度的评估，允许选择作为曲目。与峰值相对应的派别组成的质谱学分析显示，81个氨基酸残留物与原始分子基准序列中50%的氨基酸覆盖相匹配。它开发了一种肽测绘技术，然后用vh方法分离酶水解产品。结果表明肽卡的特殊性和稳定性。这种方法可以用来验证重组干扰素beta -1b的结构，而不包含蛋白质性质的辅助物质。

本文章由计算机程序翻译，如有差异，请以英文原文为准。

求助全文

约1分钟内获得全文去求助

来源期刊

Биофармацевтический журнал

自引率

0.00%

发文量