原发性高血压患者血浆和尿液细胞外囊泡中的糜蛋白酶活性

背景：循环中的细胞外囊泡（EVs）携带核酸、蛋白质和代谢物等受保护的货物。在此，我们鉴定并验证了从原发性高血压患者血液和尿液中分离出的EVs中的糜蛋白酶、血管紧张素转换酶1（ACE）和2（ACE2）以及肾酶（NEP）的表面蛋白和酶活性：方法：对 34 名高血压患者的外周静脉血和点滴尿液进行处理，以分离血浆和尿液中的 EVs。免疫金标记和透射电子显微镜验证了血浆和尿液 EVs 表面存在外泌体标记蛋白 CD63。流式细胞术鉴定了血浆和尿液EV的CD63、CD9和CD81表面标记物。此外，还通过 Western 印迹分析了尿液中的外泌体 CD63、TSG101 和 Alix。尿液 EVs 不表达内质网蛋白 calnexin 和高尔基体蛋白 GM130。通过 HPLC 对 125I 底物 - 血管紧张素-（1-12）[Ang-（1-12）] 和血管紧张素 II (Ang II) - [各 1 nmol/L]的 Chymase、ACE、ACE2 和 NEP 活性进行量化。数据根据患者血压是否得到控制进行分析（第一组：结果；第二组：结果；第三组：结果）：血浆和尿液中的 EVs 对 Ang-(1-12) 的糜蛋白酶活性明显高于 ACE、ACE2 和 NEP。此外，尿液 EVs 中的糜蛋白酶活性是血浆 EVs 中的 3 倍多。第二组患者的血浆和尿液 EV 中的糜蛋白酶活性都有所增加。第一组和第二组患者尿液 EV 中 ACE、ACE2 和 NEP 的酶活性没有可比性差异：这些研究表明，从高血压患者体内分离出的血浆和尿液 EVs 中，肾素血管紧张素系统酶的酶活性存在差异。在 EVs 中显示出相对较高的糜蛋白酶酶活性，进一步证实了之前关于高血压患者血浆 Ang-(1-12) 增高的发现。