Clonación del cDNA codificante de las subunidades de la gonadotropina luteinizante de Pimelodus grosskopfii

James Betancur-López, María Fernanda Flórez, Ana María Pérez-O´Brien, Neil A. Vásquez-Araque, Andrés Montoya-López
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Abstract

Pimelodus grosskopfii, es un Siluriforme importante en la pesca continental en Colombia y de interes en la acuicultura. La presente investigacion tuvo como objetivo clonar y determinar la secuencia codificante de las subunidades GP-α y LHβ de la gonadotropina luteinizante de esta especie. Para lograr lo anterior, el ARN total de glandulas pituitarias fue extraido y se realizo sintesis de cDNA. Los productos de PCR purificados de GP-α y LHβ fueron ligados en pJET1.2/blunt® seguido de la transformacion de Escherichia coli DH5α® y posterior secuenciacion de fragmentos de interes. El marco abierto de lectura de las subunidades GP-α y LHβ fue de 351 pb (116 aminoacidos) y 423 pb (140 aminoacidos), respectivamente. Se encontro una alta homologia (aminoacidos) en la subunidad GP-α con otras familias de Siluriformes (87-99%) y menor homologia con ordenes como Perciformes, Salmoniformes y Cypriniformes (66-90%). De igual manera para la subunidad LHβ, la homologia (aminoacidos) fue alta al interior del orden Siluriformes (91-97%) y menor con otros ordenes (65-86%). Los resultados obtenidos en el presente estudio ofrecen informacion basica sobre las secuencias de las gonadotropinas en bagres neotropicales y pueden ser utilizados para el desarrollo de hormonas recombinantes para optimizar el control reproductivo en P. grosskopfii.
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Pimelodus grosskoffii是哥伦比亚大陆渔业中的一种重要鲶鱼,对水产养殖有兴趣。本研究的目的是克隆和确定该物种黄体化促性腺激素GP-α和LHβ亚基的编码序列。为此,提取垂体总RNA并合成cDNA。纯化的GP-α和LHβPCR产物在Pjet1.2/blunt中连接® 其次是大肠杆菌DH5α的转化® 然后对感兴趣的片段进行测序。GP-α亚基和LHβ亚基的开放阅读框分别为351 PB(116个氨基酸)和423 PB(140个氨基酸)。GP-α亚基与其他水飞蓟形目(87-99%)有很高的同源性(氨基酸),与鲈形目、鲑鱼形目和鲤形目(66-90%)的同源性较低。与LHβ亚单位一样,Siluriformes目内部的同源性(氨基酸)很高(91-97%),与其他目(65-86%)的同源性较低。本研究的结果提供了新热带鲶鱼促性腺激素序列的基本信息,可用于开发重组激素,以优化大口鲶的生殖控制。
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