Use of protein kinase C and phospholipase A2 inhibitors in bovine endometrial cells treated with estradiol and calcium ionophore

Abstract

A liberacao endometrial de prostaglandina-F2α (PGF2α) em femeas bovinas pode ser induzida in vivo pelo estradiol (E2). Entretanto o seu mecanismo de acao ainda nao foi bem esclarecido. Nossa hipotese e que o E2 estimula a atividade e a abundância da proteina quinase C (PKC) e da fosfolipase A2 (PLA2). Nosso objetivo com este estudo foi analisar os efeitos de inibidores de PKC e PLA2 na sintese de PGF2α induzida por E2 e ionoforo de calcio (CI) em celulas endometriais bovinas (celulas BEND; Experimento 1). Adicionalmente, nos avaliamos a abundância de PKC e PLA2 em explantes endometriais de vacas tratadas com ou sem E2 17 dias apos o estro (D17, D0 = estro; Experimento 2). No Experimento 1, celulas BEND foram submetidas ao inibidor de PKC (10 μM de C25H24N4O2; bisindolylmaleimide I, ou BIS I), e ao inibidor de PLA2 (20 μM de arachydoniltrifluoromethane ou AACOCF3) ou a nenhum inibidor. As celulas BEND foram subsequentemente tratadas com E2 e CI e concentracoes de PGF2α foram mensuradas no meio de cultura por radioimunoenssaio. Para DIF-12 (concentracao de PGF2α 12 horas depois do tratamento, subtraida da concentracao de PGF2α na hora 0), nao foi observado efeito do inibidor de PKC (P = 0.2709). Entretanto DIF-12 foi menor (P < 0.05) nos grupos tratados com inibidor de PLA2 e inibidor de PLA2 + CI + E2 quando comparados com o grupo controle e o grupo CI + E2. O AACOCF3 foi um eficiente inibidor de PLA2 em sistema de cultura de celulas BEND e o E2 nao estimulou a sintese de PKC e PLA2. No Experimento 2, novilhas Nelore ciclicas receberam 3 mg de 17β-E2 (n = 6) ou nenhum tratamento (n = 5) no D17 e foram abatidas duas horas depois da administracao dos tratamentos. A quantidade de PKC e PLA2 no tecido endometrial foi avaliada pela tecnica de Western Blotting. Nao foi observado efeito do E2 sobre a PKC (P= 0.08) e nem sobre a PLA2 (P= 0.56). Conclui-se que o E2 nao estimulou a atividade e abundância de PKC e PLA2.