稀释储存介质的研制及冷冻保护剂对冷却至5℃的白斑竹鲨精液的影响

通过三个实验评价了渗透压、温度、培养基和冷冻保护剂对白斑竹鲨精子的影响。使用按摩技术从7只不同的雄性动物身上采集精液，将动物保持在强直性固定状态，并将其鳃浸没。使用计算机辅助精子分析（CASA）系统来评估精子活力。实验一评估了Hank平衡盐溶液（HBSS）在不同渗透压（200、400、800和1000mOsm Kg1）和培养温度（5°C和24°C[室温]）下随时间（6小时、12小时和24小时）的影响。膜的完整性和形态随着时间的推移而退化（P<；0.05）；然而，用HBSS 1000和HBSS 800扩展的精子受到的影响最小。HBSS 1000和HBSS 800分别观察到较高的精子总运动率（TM）和平均路径速度（VAP，P＞0.05）参数。此外，与在5°C下保存的精子相比，TM、VAP和曲线速度（VCL）均降低（P<；0.05）。实验二比较了在5°C的水晶礁水（CRW）、蓝枝海鞘（ER）或生海鞘中稀释精子的效果。结果表明，与在5°C下用ER或Raw稀释的精子相比，CRW提高了活力、TM、VAP、VSL、VCL和直线度（STR）。最后的实验比较了在5°C温育期间不同的冷冻保护剂（二甲基亚砜[DMSO]10%、DMSO20%、乙二醇[EG]10%、EG 20%和海藻糖[Tre]10%、Tre 20%）。在所有时间点上，与所有其他培养基和原始培养基相比，在Tre（10%或20%）中孵育的精子具有增加（P<；0.05）的膜完整性和正常形态。在所有时间点上，与类似于生的EG（10%和20%）和20%DMSO相比，暴露于Tre（10%和20%）和10%DMSO的精子具有显著改善的TM（P<；0.05）。尽管从WSBS收集的精子是健壮的，并且似乎能耐受广泛的渗透条件和培养基，但在1000mOsm Kg1下制备的培养基应能提供最佳的体外渗透压，而在较低温度下储存应能提高储存存活率。对于未来的冷冻保存研究，应评估使用TRE和DMSO作为冷冻保护剂的培养基。