Caracterización enzimática de una celulasa producida por Bacillus sp. (GCB-13) para la degradación de sustratos lignocelulósicos

Israel José Salazar Quispe, Ariadna Zatyuri Zuñiga Llanos, Julissa Naquiche Calero, Cristina Isabel Ferrer Villena, R. Cabrera
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Abstract

Para esta investigación, se estudió la cinética de la enzima celulasa producida por la bacteria Bacillus sp GCB-13, aislada de los géiseres de Candarave. La bacteria alcanzó una fase logarítmica a partir de las 24 horas de incubación. La producción enzimática fue desarrollada usando CMC como sustrato, determinándose la concentración de azúcares reductores mediante el método del Ácido Dinitrosalicílico (DNS) y la evaluación de proteínas totales con el método de Bradford. El extracto enzimático crudo obtenido fue aplicado sobre sustratos lignocelulósicos naturales como tallos y hojas del geranio (Pelargonium x hortorum), y sobre sustratos sintéticos como papel bond y Carboximetilcelulosa (CMC), para evaluar su potencial de degradación. Es así que se obtuvieron los valores de azúcares reductores de 3.499 mg/ml; 0.116 mg/ml, 0.083 mg/ml y 0.593 mg/ml. Los parámetros cinéticos fueron calculados empleando la ecuación de Eadie-Hofstee, obteniendo un valor de Km y V de 3.43 μM de CMC y 0.012 máx mg/ml.min, respectivamente. Finalmente, se evaluaron las actividades enzimáticas a diferentes valores de pH y temperaturas, correspondiendo los mayores niveles de actividades de 4.4 U/ml a 45 °C a pH 7.0, 3.04 U/ml a 45 °C a pH 5.0 y 3.6 U/ml a 45 °C a pH 10.
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芽孢杆菌产生的纤维素酶(GCB-13)降解木质纤维素底物的酶学特性
本研究研究了从Candarave间歇泉中分离出的芽孢杆菌sp gbc -13产生的纤维素酶的动力学。细菌在培养24小时后达到对数阶段。以CMC为底物进行酶生产,用二硝基水杨酸法测定还原糖浓度,用Bradford法评价总蛋白。将获得的粗酶提取物应用于天竺葵(天竺葵x hortorum)的茎、叶等天然木质纤维素底物,以及铜纸和羧甲基纤维素(CMC)等合成底物,以评价其降解潜力。因此,还原糖值为3.499 mg/ml;0.116 mg/ml、0.083 mg/ml、0.593 mg/ml。动力学参数采用eadi - hofstee方程计算,Km和V值为3.43 μM CMC, 0.012 max mg/ml。min分别。最后,我们评估了不同pH值和温度下的酶活性,对应的最高活性水平为4.4 U/ml在45°C pH 7.0, 3.04 U/ml在45°C pH 5.0和3.6 U/ml在45°C pH 10。
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