Optimasi dan Validasi Metode KCKT untuk Identifikasi dan Penetapan Kadar Vitamin B1, B3, B6, dan Kofein dalam Suplemen Kesehatan

Uji identifikasi dan penetapan kadar merupakan salah satu persyaratan mutu suplemen kesehatan yang mengandung vitamin B1, B3, B6, dan kofein sehingga diperlukan metode analisis yang optimal untuk mendeteksi secara simultan analit-analit tersebut dalam suatu campuran matriks. Saat ini telah tersedia metode analisa KCKT sistem gradien untuk pengujian tersebut. Namun, dari metode analisa tersebut diperoleh profil kromatogram yang belum optimal dengan nilai resolusi 0,844 pada puncak analit vitamin B3 dan B1. Hal ini disebabkan masih berhimpitnya puncak kedua analit dan tidak terpisah dengan baik pada baseline kromatogram. Oleh karena itu dianggap perlu untuk melakukan optimasi pada metode analisa ini dengan melakukan modifikasi perbandingan komposisi fase gerak sistem gradien pada menit terelusinya vitamin B3 dan B1. Metodologi penelitian menggunakan penelitian eksperimental laboratorium dengan parameter yang diamati adalah profil kromatogram pemisahan puncak analit dan nilai resolusi antara vitamin B3 dan B1. Berdasarkan data hasil optimasi diperoleh komposisi fase gerak ammonium asetat : asetonitril (25:75) yang memberikan profil kromatogram optimal terhadap pemisahan vitamin B3 dan B1 dengan nilai resolusi 7,230 untuk vitamin B3 dan 3,427 untuk vitamin B1 (syarat resolusi > 2). Metode optimasi kemudian dilanjutkan dengan validasi metode analisa dengan hasil uji parameter selektifitas, akurasi, presisi, linearitas, nilai LOD, dan nilai LOQ memenuhi syarat keberterimaan sehingga metode ini dapat digunakan untuk melakukan pengujian identifikasi dan penetapan kadar vitamin B1, B3, B6, dan kofein dalam sediaan suplemen kesehatan.Identification and assay tests are one of the quality requirements of health supplements containing vitamins B1, B3, B6, and caffeine, so an optimal analytical method is needed to detect these analytes simultaneously in a matrix mixture. Currently, a gradient system HPLC analysis method is available for this test. However, from this analysis method, the chromatogram profile was not optimal with a resolution value of 0.844 at the peak of the vitamin B3 and B1 analytes. This is because the peaks of the two analytes are still close together and are not well separated on the baseline chromatogram. Therefore, it is considered necessary to optimize this analytical method by modifying the ratio of the mobile phase composition of the gradient system at the minute of elution of vitamins B3 and B1. The research methodology used experimental laboratory research with the parameters observed were the chromatogram profile of analyte peak separation and the resolution value between vitamins B3 and B1. Based on the optimization data, the mobile phase composition of ammonium acetate: acetonitrile (25:75) provides an optimal chromatogram profile for the separation of vitamins B3 and B1 with a resolution value of 7,230 for vitamin B3 and 3,427 for vitamin B1 (resolution > 2). The optimization method is then followed by validation of the analytical method with the test results of the parameters of selectivity, accuracy, precision, linearity, LOD value, and LOQ value meeting the acceptance requirements so that this method can be used to test the identification and determination of vitamin B1, B3, B6, and caffeine levels. in the preparation of health supplements.