Reg3A 过表达通过改变 LoVo 结肠癌细胞的细胞粘附性促进肝转移

DNA and cell biology Pub Date : 2024-06-01 Epub Date: 2024-04-26 DOI:10.1089/dna.2024.0029

Ke-Yi Xu, Mao Li, Wei-Hong Yu, Xin Li, Yuan Zeng, Fei-Lu Xie, Yi-Han Zhou, Pin-Shen Xu, Chun-Cheng Pu, Bing-Bing Xie, Lu-Ting Yu, Chen Luo

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摘要

Reg3A 在多种癌症中上调，被认为是抗肿瘤治疗的潜在靶点。然而，Reg3A 在肿瘤转移中的作用一直难以捉摸。本研究旨在揭示 Reg3A 过表达在 LoVo 结肠癌细胞肝转移中的作用。研究人员构建了过表达 Reg3A 的 LoVo 细胞稳定细胞系（LoVo-luc-Reg3A），并标记了 luc 报告基因。分别使用 MTT、EdU、Hoechst 染色、流式细胞术和透孔试验测定细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。在 BALB/c 裸鼠体内研究了 LoVo-luc-Reg3A 细胞的肝转移情况。通过活体生物发光成像、组织学检查和 mRNA 测序（mRNA-seq）来评估转移效率和基因表达变化。通过 Western 印迹和酶联免疫吸附试验测定 Reg3A 的含量。在 Matrigel 培养液中测定细胞附着能力。Reg3A 的过表达不会促进 LoVo 细胞的增殖或凋亡，但会促进细胞的迁移和侵袭。在肝转移模型中，Reg3A 的过表达增加了转移集落的数量。mRNA-seq的结果表明，Reg3A的上调导致349个差异表达基因（DEGs），与正常结肠组织相比，其中许多基因与结肠腺癌的肿瘤发生有关。基因本体富集分析表明，这些差异表达基因主要与细胞粘附、白细胞调控、细胞外基质（ECM）重塑、整合素结合和 STAT 蛋白结合有关。Reg3A过表达导致肝转移的局部肿瘤组织和体外培养细胞的ECM/细胞外基质中富含Reg3A蛋白。然而，血清和培养基中的 Reg3A 浓度相对较低。Reg3A 的过表达也会导致附着在 Matrigel 上的细胞数量增加，而 siRNA-Reg3A 和针对 Reg3A 的单链可变片段可减轻这种现象。内源性 Reg3A 过表达促进了 LoVo 结肠癌细胞的肝转移。这种转移效应可能是由于 Reg3A 在 ECM 中的富集改变了细胞的粘附行为。

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