MSI2 在造血干细胞中介导 WNT/β-Catenin 通路功能

IF 13.4 1区 医学 Q1 HEMATOLOGY Leukemia Pub Date : 2024-10-22 DOI:10.1038/s41375-024-02447-9
Huifang Zhang, Ruixue Guo, Zhenfen Li, Rui Ma, Shina Xu, Le Yin, Hongkai Zhu, Zineng Huang, Cheng Xing, Yunlong Yang, Yulin Pu, Zhao Cheng, Jing Liu, Hongling Peng, Yue Sheng
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摘要

首先,我们从野生型(WT)小鼠和Apc基因敲除(Apc KO,Apc-/-)小鼠(分别为Apcfl/fl和Apcfl/flMx1Cre)中筛选出造血干细胞(HSCs)和造血干细胞及祖细胞(HSPCs)。Apc缺失是通过注射Poly(I:C)诱导的。定量 PCR(qPCR)显示,Apc KO 小鼠的造血干细胞(lin-c-Kit+ Sca1+CD150+CD48-)和 HSPCs(lin-c-Kit+)中 Msi2 的表达显著下降(图 1B, C)。为了研究MSI2在WNT信号通路中的作用,我们通过逆转录病毒感染在Apc-/- HSPCs中重新表达MSI2,Western blot(WB)证实Msi2被成功过表达(补充图1)。集落形成试验表明,恢复MSI2的表达可以部分挽救Apc+/-和Apc-/-细胞中观察到的减弱的集落形成能力(图1D,E)。为了进一步研究MSI2和WNT信号通路之间的关系,我们在Apc KO细胞中恢复MSI2表达后进行了体内移植实验。注射5-FU五天后,用MigR1载体或MSI2感染WT(Apcfl/fl)或Apcfl/fl Mx1Cre小鼠的HSPCs,然后移植到接受致死性照射(10 Gray)的CD45.1受体小鼠体内。一个月后,每隔两天腹腔注射一次 pIpC 以诱导 Mx1Cre 的表达,从而敲除 Apc。第三次注射 pIpC 七天后,小鼠安乐死,收集骨髓细胞进行检测(图 1G)。与 Apc KO 小鼠的细胞相比,MSI2 表达的恢复大大增加了造血干细胞(Lin-c-Kit+Sca1+CD48-CD150+)、LSK(Lin-c-Kit+Sca1+)和 HPC(Lin-c-Kit+Sca1-)的数量(图 1H 和补充图 3)。此外,HPC 群体中粒细胞-单核细胞祖细胞(GMP)和普通髓系祖细胞(CMP)的比例也恢复正常。巨核细胞-红细胞祖细胞(MEP)也发生了变化,但不明显(图 1I 和补充图 4)。Apc 缺失可诱导细胞凋亡显著增加,这是 HSPCs 减少的主要原因之一[7]。我们发现,恢复 MSI2 的表达可以显著抑制 Apc 缺失引起的细胞凋亡增加(图 1J 和补充图 5A,B),这表明 MSI2 可以通过抑制细胞凋亡部分挽救 Apc 缺失引起的 HSPCs 下降。除HSPCs外,我们还分析了成熟细胞的变化,发现恢复MSI2表达后,骨髓和脾脏中的髓样细胞均显著增加(图1K和补充图6A、B)。相反,骨髓中的 B 细胞(补充图 7A、B)和胸腺中的 T 细胞(补充图 8A、B)没有明显变化。
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来源期刊
Leukemia
Leukemia 医学-血液学
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3-6 weeks
期刊介绍: Title: Leukemia Journal Overview: Publishes high-quality, peer-reviewed research Covers all aspects of research and treatment of leukemia and allied diseases Includes studies of normal hemopoiesis due to comparative relevance Topics of Interest: Oncogenes Growth factors Stem cells Leukemia genomics Cell cycle Signal transduction Molecular targets for therapy And more Content Types: Original research articles Reviews Letters Correspondence Comments elaborating on significant advances and covering topical issues
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