Identification des cibles antigéniques reconnues par les auto-anticorps dans la pemphigoïde bulleuse à l’aide d’un nouveau test ALBIA

Introduction

L’Elisa est la technique de référence pour le diagnostic des maladies bulleuses de la JDE. Il permet essentiellement de détecter des anticorps (Ac) anti-BP230, anti-NC16A ou anti-collagène 7. Cette technique a plusieurs inconvénients : (i) elle ne détecte pas les autres protéines cibles telles que les laminines 332, γ1 et β4, ou les Ac dirigés contre le domaine C-terminal (C-ter) de BP180 ; (ii) elle nécessite de tester chaque cible indépendamment, (iii) elle ne détecte que les IgG. Bien que la majorité des sérums de pemphigoïde bulleuse (PB) reconnaissent NC16A, épitope immunodominant de BP180, certains sérums sont négatifs en Elisa alors qu’une bande de 180 kDa est reconnue en blot, suggérant la reconnaissance d’autres domaines de BP180 que NC16A; enfin, certains sérums demeurent négatifs, notamment en cas de PB avec atteinte muqueuse. L’objectif de cette étude a été d’évaluer un nouveau test sérologique utilisant la technologie addressable laser bead immuno-assay (ALBIA), que nous avons mise au point pour l’identification des différentes protéines de la JDE potentiellement reconnues par les sérums de PB.

Matériel et méthodes

Quatre-vingt-dix sérums de PB ont été étudiés et classés en trois groupes : (1) Elisa NC16A positif ; (2) Elisa négatif, blot positif ; (3) Elisa et blot négatifs. Cent sérums contrôles de sujets sains ont également été testés. Un test ALBIA multiplex a été mis au point afin de doser les IgG et IgA dirigées contre les domaines NC16A et C-ter de BP180, et les domaines NC1 et NC2 du collagène 7.

Résultats

Quarante-neuf sérums étaient positifs en Elisa NC16A, parmi lesquels 42 (86 %) étaient également positifs en ALBIA NC16A, (vs 4 % des sérums témoins [p < 0,0001]) ; 13 sérums (27 %) reconnaissaient en outre le domaine C-ter de BP180 en ALBIA. Parmi les 23 sérums Elisa négatif, blot positif, 14 (61 %) reconnaissaient le domaine C-ter de BP180 et 1 (4 %) reconnaissait le domaine NC16A en ALBIA (vs 3 % des sérums contrôles [p < 0,0001]). Parmi les 18 sérums négatifs en blot et en Elisa, 9 (50 %) reconnaissaient les domaines NC16A et/ou C-ter de BP180 en ALBIA. Les Ac anti-C-ter étaient aussi bien retrouvés dans les sérums de PB avec que sans atteinte muqueuse: 3/21 (14 %) vs 15/48 (31 %).

De façon inattendue, des IgA dirigées contre les épitopes NC16A et C-ter de BP180 et le collagène 7 étaient détectés en ALBIA dans respectivement 6, 16 et 55 sérums de PB. Des IgA anti-collagène 7 étaient trouvés dans la totalité (18/18) des sérums négatifs en blot et Elisa.

Discussion

Des Ac dirigés contre le domaine C-ter de BP180 sont fréquemment mis en évidence, aussi bien dans les sérums de PB avec que sans atteinte muqueuse. Des IgA dirigées contre le collagène 7 ont été détectées dans la totalité des sérums négatifs en blot et Elisa, suggérant qu’une partie de ces patients puisse correspondre à une forme BP-like d’EBA.

Conclusion

Ce nouveau test sérologique ALBIA a permis de confirmer le diagnostic de PB chez 50 % des patients séronégatifs avec les examens actuels blot et Elisa.