IF 0.6 Q3 MULTIDISCIPLINARY SCIENCES Revista Investigaciones Altoandinas-Journal of High Andean Research Pub Date : 2023-04-30 DOI:10.18271/ria.2023.447
Ralph Stein Rivera-Botonares, S. M. Oliva-Cruz, Daniel Tineo Flores
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摘要

本研究从秘鲁亚马逊地区的三种Vasconcellea属植物(V. chachapoyensis、V. heilbornii和V. pubescens)的乳胶中获得了木瓜蛋白酶。提取的乳胶用醋酸钠缓冲液、EDTA和亚硫酸氢钠溶液进行调理。采用Andrade(2011)方法进行纯化,采用硫酸铵进行沉淀;96°乙醇两级稀释;用0.1 N NaOH调节pH至6.0和8.0,分三步离心;在-65°C下冷冻12小时;在0.1 - 0.6 mbar真空和-84 -85°C歧管温度下冻干24 - 36小时,最后包装在深色瓶中。采用乳凝法(球和胡佛)测定酶活性(AE), 3种植物在pH 6.0时的AE值高于pH 8.0时的AE值;chachapoyensis的ea平均值最高(240.97 Upe),其次是毛毛V. (195.80 Upe)和heilbornii V. (112.45 Upe),也明显高于商品木瓜蛋白酶(208.14 Upe)。毛毛V. pubescens的蛋白水解活性高于其他物种。
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Extracción y purificación de papaína obtenida a partir de tres especies nativas del género Vasconcellea
En esta investigación se obtuvo la enzima papaína a partir de látex de tres especies del género Vasconcellea, V. chachapoyensis, V. heilbornii y V. pubescens, especies nativas de la región Amazonas en Perú. El látex extraído se acondiciono con buffer acetato de sodio, EDTA y solución de bisulfito de sodio. La purificación se realizó adaptando el método de Andrade (2011), se utilizó sulfato de amonio para la precipitación; etanol de 96° en dos etapas para la dilución; se regulo el pH a 6.0 y 8.0 con NaOH 0.1 N, se centrifugo en tres etapas; se congelo a -65 °C por 12 horas; y liofilizo de 24 a 36 horas con vacío de 0.1 a 0.6 mbar y temperatura de colector de -84 a -85 ° C, finalmente se envaso en frascos oscuros. Utilizando el método de coagulación de leche (Balls and Hoover) se determinó la actividad enzimática (AE), las tres especies obtuvieron mayores valores de AE a pH 6.0 que a pH 8.0; la V. chachapoyensis presento mayor promedio significativo de AE (240.97 Upe), seguido de V. pubescens (195.80 Upe) y V. heilbornii (112.45 Upe), también fue significativamente superior a la papaína comercial (208.14 Upe). La V. pubescens tuvo mayor actividad proteolítica que las otras especies.
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