DIFERENTES MÉTODOS PARA PROCESSAMENTO DE AMOSTRAS DE CÉLULAS DA GRANULOSA OBTIDAS POR ASPIRAÇÃO FOLICULAR PARA A EXTRAÇÃO DE RNA

Cristina Sangoi Haas, J. G. Ferst, Camila Amaral D’Avila, F. P. Moraes, F. C. Oliveira, Sergio Farias Vargas Jr, P. B. Gonçalves, Bernardo Garzieira Gasperin
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Abstract

O estudo da expressão gênica das células foliculares pode ser a chave para o entendimento dos processos de crescimento folicular, ovulação e luteinização. As células foliculares de animais podem ser recuperadas in vivo através da aspiração folicular (AF) guiada por ultrassonografia, uma alternativa para não submeter as fêmeas ao procedimento cirúrgico de ovariectomia. Entretanto, a AF comumente possibilita a recuperação de uma pequena quantidade de células em fluido folicular, geralmente contaminado por células sanguíneas, o que prejudica a extração de RNA e interfere na qualidade da amostra. No presente estudo foram comparadas a coleta e o armazenamento de células foliculares com solução salina, Trizol®, dois tampões de lise de eritrócitos ou RNA later®. Quantidades adequadas de RNA e amostras de melhor qualidade com base na expressão dos genes de referência 18S rRNA, GAPDH, RPL19 e PPIB foram obtidas nas células foliculares tratadas com tampão de lise celular imediatamente após a coleta.
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卵泡细胞基因表达的研究可能是了解卵泡生长、排卵和黄体化过程的关键。动物卵泡细胞可以在体内通过超声引导的卵泡抽吸(fa)恢复,这是一种不接受卵巢切除术的女性的替代方法。然而,fa通常允许从卵泡液中回收少量细胞,通常被血细胞污染,这损害了RNA的提取,并干扰了样品的质量。在本研究中,我们比较了用生理盐水、Trizol®、两种红细胞裂解缓冲液或RNA later®收集和储存卵泡细胞。采集后立即用细胞裂解缓冲液处理卵泡细胞,获得足够数量的RNA和基于参考基因18S rRNA、GAPDH、RPL19和PPIB表达的优质样本。
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