De l’intérêt d’établir un modèle préclinique de lymphome cutané B à grandes cellules de type jambe

Abstract

Introduction

Les lymphomes cutanés B à grandes cellules de type jambe sont une entité spécifique de la classification OMS présentant un profil d’expression correspondant à une cellule d’origine B lymphocytaire post-centre germinatif, IgM+. Nous avons décrit le profil mutationnel de cette entité.

Ces cancers rares posent le problème de pouvoir caractériser les mécanismes de résistance thérapeutique des cellules tumorales. La mort massive des cellules tumorales en suspension n’avait pas permis l’établissement de lignée.

Matériel et méthodes

Afin d’obtenir le premier modèle de cette entité, nous avons réalisé une xénogreffe orthotopique sous-cutanée de plusieurs patients et réalisé des étapes de greffes secondaires. Parallèlement, nous avons mis en culture les cellules obtenues de ces xénogreffes successives. Le phénotype par immunohistochimie et cytométrie et le génotype des xénogreffes et de la lignée obtenue ont été comparés à ceux de la tumeur primitive ainsi que le séquençage transcriptomique.

Resultats

Nous avons réalisé la xénogreffe de la tumeur d’une patiente de 85 ans présentant un lymphome B cutané type jambe. La première xénogreffe a donné une tumeur en 42 jours et à 73 jours le sacrifice a permis de réaliser une autopsie associée à la remise en suspension des cellules et xénogreffe secondaire.

La cytométrie montrait l’expression de CD19, CD20 et CD45. L’analyse histologique et l’immunohistochimie anti-HLA-ABC confirmait l’infiltration cutanée, hépatosplénique, rénale et fémorale. Les cellules mises en culture ont permis d’obtenir une lignée avec plus de 200 divisions au bout d’un an qui était également capable de permettre des xénogreffes successives.

Le modèle de xénogreffe et la lignée conservaient l’expression CD20, BCL2, MUM1, IgM, BCL6^faible avec celle de MYC and Ki-67 caractéristique de cette entité. Le séquençage massif retrouvait les mutations combinées des gènes MYD88, CD79B and PIM1 définissant le sous-type de ces lymphomes. La multi-FISH and la SNP-array montraient un profil génétique stable. Le séquençage transcriptomique montrait l’activation de NF-KB et de MYC. Un test pharmacologique montrait une réponse plus intense à l’ibrutinib (IC 50 : 2,6 nM) par rapport à un modèle « équivalent » de lymphome B systémique (lignée OCI-Ly3).

Conclusion

Ce premier modèle démontre la faisabilité de notre approche ce qui permettra d’obtenir d’autres modèles représentant la diversité des lymphomes B cutanés agressifs. Il permet d’étudier les interactions avec le microenvironnement tumoral qui seront analysées sur le plan fonctionnel et par des techniques de transcriptomique en cellule unique.