Impact de l’activation de la GTPase Rac dans la maturation et les fonctions de l’éosinophile dans l’asthme sévère

Abstract

Introduction

L’asthme est une pathologie bronchique caractérisée par une hyperréactivité bronchique, un remodelage tissulaire et une inflammation chronique. Nos travaux ont montré que la GTPase Rac était activée au sein des éosinophiles dans un modèle murin d’asthme allergique sévère. Notre objectif est d’évaluer le rôle de la protéine Rac dans la maturation et la dégranulation des éosinophiles.

Méthodes

Les éosinophiles étudiés ont été obtenus par différenciation de cellules médullaires issues de moelles osseuses de souris. Les niveaux de Rac-GTP ont été évalués au cours de la maturation cellulaire par cytométrie en flux et western blot. Sur le plan fonctionnel, la dégranulation des éosinophiles est induite in vitro par le platelet activating factor (PAF) et évaluée par la mesure de l’activité peroxidase et RNase.

Résultats

Le protocole de différenciation des cellules médullaire permet d’obtenir des cultures cellulaires contenant 95 % d’éosinophiles. Au cours de cette différenciation, le niveau de Rac actif (Rac-GTP) augmente significativement (j4 0,6 vs j11 2,7, p = 0,03). Par cytométrie en flux, nous avons déterminé que cette élévation concerne principalement les éosinophiles. Nous avons observé que le PAF entraîne la dégranulation des éosinophiles en culture avec une libération d’éosinophile péroxidase et de RNases. Cette dégranulation s’accompagne d’une augmentation de l’activation de Rac. L’inhibition pharmacologique de Rac génère une accumulation des granules au niveau de la membrane plasmique et prévient la dégranulation in vitro (diminution de 74 %, p = 0,002) et sur des lysats pulmonaires de modèles d’asthme sévère.

Conclusions

Nos résultats mettent en évidence que l’activation de Rac participe à la maturation et à la dégranulation des polynucléaires éosinophiles. Rac apparaît comme une nouvelle cible thérapeutique dans l’asthme allergique pour lutter contre l’inflammation.