间充质干细胞衍生的细胞外囊泡通过输送 miR-200a 抑制肝纤维化的作用

摘要 背景：肝纤维化（HF）是慢性肝病的常见病理特征。我们旨在阐明羊膜间充质干细胞（AMSCs）衍生的细胞外囊泡（AMSCs-EVs）在肝纤维化中的意义。 方法：分离并鉴定人类AMSCs-EVs。构建高血脂小鼠并用EVs治疗。通过染色实验和Western blot（WB）检测观察小鼠的纤维化情况。检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）和肝羟脯氨酸（Hyp）以确认肝功能。在体外实验中，用转化生长因子-β诱导人肝星状细胞并用 EVs 处理。为了测量肝纤维化的程度，采用 WB 检测法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和胶原 I 的表达，采用细胞计数试剂盒 8 检测细胞增殖。通过WB和实时定量聚合酶链反应检测了miR-200a、锌指E盒结合同工酶1（ZEB1）和磷酸肌醇-3-激酶调节亚基3（PIK3R3）的水平。通过染色质免疫沉淀和双荧光素酶试验分析了ZEB1与PIK3R3的结合以及miR-200a与ZEB1的结合，以验证它们之间的关系。 结果获得了人类 AMSCs 和 AMSCs-EV。血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、TBIL和肝脏Hyp均升高，这意味着HF小鼠的肝纤维化程度加重，而EVs治疗后肝纤维化程度又有所减轻。EVs通过降低α-SMA和胶原蛋白I以及促进细胞增殖来抑制HF程度。AMSCs-EVs 将 miR-200a 递送到肝细胞，上调 miR-200a 的表达，抑制 ZEB1 的表达，减少其在 PIK3R3 启动子上的富集，从而抑制 PIK3R3 的表达，缓解 HF。ZEB1或PIK3R3的过表达削弱了AMSCs-EVs的抗纤维化作用。 结论人AMSCs衍生的EVs介导了miR-200a的传递和细胞内ZEB1/PIK3R3轴的抑制，从而发挥了抗纤维化的作用。