Low doses of alkylating agents do not harm human ovarian tissue destined for cryopreservation

Abstract

Objective

To investigate the impact of nongonadotoxic doses of alkylating agents on human ovarian cortex.

Design

Retrospective study.

Subjects

Biopsies from 78 patients who had undergone ovarian tissue cryopreservation were retrieved and analyzed. Among them, 42 had previously been treated with chemotherapy (alkylating agents, dose <3,400 mg/m²), making up the chemotherapy group, whereas 36 had not been given any chemotherapy, constituting the control group.

Main Outcome Measures

Follicle count and classification, morphology study, immunostaining for apoptosis (cleaved caspase-3), immunostaining for activation (phospho-Akt), fibrosis (Masson’s trichrome), and vascularization (von Willebrand factor and smooth muscle actin).

Results

In the prepubertal group, 271 follicles/mm³ were detected in control patients and 501 follicles/mm³ in chemotherapy-exposed subjects. In the adult group, 4,916 follicles/mm³ were found in control patients and 6,570 follicles/mm³ in chemotherapy-exposed patients. No difference in follicle density was observed between the 2 groups in any age category. Neither did we encounter any significant difference in follicle viability according to chemotherapy exposure or age. Proportions of nongrowing follicles were >76% in all age groups, irrespective of chemotherapy exposure, and higher, although not significantly, in the chemotherapy group compared with the control group. There were significantly fewer secondary follicles in the adult chemotherapy group than in the adult control group. Concerning apoptosis, no significant difference was observed between control and chemotherapy subjects in any age groups. Numbers of activated follicles were systematically higher in all age categories in the chemotherapy group than the control group. Areas of atypical follicles were noted in 4 out of 14 prepubertal patients in the chemotherapy group. In these areas, follicle density was 84,570 ± 8,837 follicles/mm³ and all follicles appeared nonviable but showed no sign of apoptosis.

Conclusion

Low-dose chemotherapy had no major impact on ovarian tissue, suggesting that ovarian tissue exposed to some chemotherapy before cryopreservation is comparable with ovarian tissue free of any chemotherapy, as clinically demonstrated by high pregnancy rates after ovarian tissue transplantation in women exposed to chemotherapy. Previous chemotherapy should therefore no longer be a contraindication to ovarian tissue cryopreservation.

Dosis bajas de agentes alquilantes no afectan el tejido ovárico humano destinado a la criopreservación

Objetivo

investigar el impacto de dosis no gonadotóxicas de agentes alquilantes en la corteza ovárica humana.

Diseño

estudio retrospectivo.

Sujetos

se recuperaron y analizaron biopsias de 78 pacientes que se habían sometido a criopreservación de tejido ovárico. Entre ellas, 42 habían sido tratadas previamente con quimioterapia (agentes alquilantes, dosis <3.400 mg/m²), constituyendo el grupo de quimioterapia, mientras que 36 no habían recibido quimioterapia alguna, constituyendo el grupo de control.

Criterios de valoración principales

recuento y clasificación de folículos, estudio morfológico, inmunotinción para apoptosis (caspasa-3 escindida), inmunotinción para activación (fosfo-Akt), fibrosis (tricrómico de Masson) y vascularización (factor von Willebrand y actina de músculo liso).

Resultados

en el grupo prepuberal, se detectaron 271 folículos/mm³ en los pacientes control y 501 folículos/mm³ en los sujetos expuestos a quimioterapia. En el grupo adulto, se detectaron 4.916 folículos/mm³ en las pacientes control y 6.570 folículos/mm³ en las pacientes expuestas a quimioterapia. No se observaron diferencias en la densidad de folículos entre los 2 grupos en ninguna categoría de edad. Tampoco encontramos diferencias significativas en la viabilidad de los folículos según la exposición a la quimioterapia o la edad. Las proporciones de folículos sin crecimiento fueron >76 % en todos los grupos etarios, independientemente de la exposición a la quimioterapia, y mayores, aunque no significativamente, en el grupo de quimioterapia en comparación con el grupo de control. Había significativamente menos folículos secundarios en el grupo de quimioterapia de adultos que en el grupo de controles adultos. En cuanto a la apoptosis, no se observaron diferencias significativas entre los sujetos de control y los de quimioterapia en ninguno de los grupos etarios. El número de folículos activados fue sistemáticamente mayor en todas las categorías de edad en el grupo de quimioterapia que en el grupo de control. Se observaron zonas de folículos atípicos en 4 de 14 pacientes prepúberes del grupo de quimioterapia. En estas zonas, la densidad folicular era de 84.570 ± 8.837 folículos/mm³ y todos los folículos parecían inviables, pero no mostraban signos de apoptosis.

Conclusiones

la quimioterapia a dosis bajas no tuvo un impacto importante en el tejido ovárico, lo que sugiere que el tejido ovárico expuesto a alguna quimioterapia antes de la crioconservación es comparable al tejido ovárico libre de cualquier quimioterapia, como demuestran clínicamente las tasas de embarazo elevadas tras el trasplante de tejido ovárico en mujeres expuestas a quimioterapia. Por tanto, la quimioterapia previa ya no debería ser una contraindicación para la criopreservación de tejido ovárico.