Identificación de una triparedoxina peroxidasa citoplasmática en Leishmania braziliensis

Pub Date : 2021-08-25 DOI:10.15446/rev.colomb.quim.v50n2.91721

Sharon Eliana Villamil-Silva, Lesly Johanna Ortiz-Joya, Luis Ernesto Contreras-Rodríguez, Gonzalo Jair Díaz- Gonzalez, María Helena Ramírez-Hernández

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Abstract

Los sistemas de defensa anti-oxidante utilizados por el parásito intracelular Leishmania braziliensis durante el proceso de infección permiten eliminar especies reactivas de oxígeno y nitrógeno a expensas de equivalentes reductores derivados de la tripanotiona, evitando daños celulares del patógeno. Con el objetivo de identificar potenciales blancos moleculares para el desarrollo de fármacos contra este parásito, se realizó la detección de la enzima triparedoxina peroxidasa citoplasmática de L. braziliensis (LbTXNPxII), la cual es esencial para disminuir concentraciones tóxicas de peróxido de hidrógeno en el contexto de infección. Para esto se generaron anticuerpos policlonales en modelo aviar, partiendo de la clonación, expresión y purificación de la proteína recombinante 6xHis-SUMO-LbTXNPxII (37kDa) en el sistema heterólogo Escherichia coli. La proteína purificada se utilizó como antígeno para la producción de anticuerpos IgY, cuya implementación en estudios in situ permitió detectar y localizar la enzima LbTXNPxII endógena (22kDa) en el citoplasma de promastigotes fijados y verificar su interacción molecular con la nicotinamida/nicotinato mononucleótido adenilil transferasa, enzima involucrada en la síntesis del NAD. De este modo, se reporta el desarrollo de una herramienta bioquímica para la identificación y estudio de la enzima LbTXNPxII y su participación en vías del metabolismo energético y de defensa anti-oxidante.

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巴西利什曼原虫细胞质三氧化二氮过氧化物酶的鉴定

巴西利什曼原虫在感染过程中使用的细胞内寄生虫抗氧化防御系统允许以牺牲来自三肽的还原当量为代价去除活性氧和氮物种，从而避免病原体的细胞损伤。为了确定开发抗这种寄生虫药物的潜在分子靶点，对巴西L.的细胞质三氧化二氧酶过氧化物酶（LBTXNPXII）进行了检测，这对于降低感染背景下过氧化氢的毒性浓度至关重要。为此，在禽模型中通过在异源大肠杆菌系统中克隆、表达和纯化重组蛋白6xHIS-SUMO-LBTXNPXII（37kDa）来产生多克隆抗体。纯化的蛋白质被用作产生IgY抗体的抗原，其在原位研究中的实施使检测和定位固定前鞭毛细胞质中的内源性LBTxNPXII酶（22kDa）成为可能，并验证其与烟酰胺/烟酸单核苷酸腺苷酸转移酶（参与NAD合成的酶）的分子相互作用。因此，报告了鉴定和研究LBTxNPXII酶及其参与能量代谢和抗氧化防御途径的生化工具的开发。

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