牛膝关节软骨不同解剖部位蛋白多糖的种群

Marcelo Augusto Marretto Esquisatto, Renata Erbert Contriciani, Edson Rosa Pimentel, Laurecir Gomes
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Duas populações de PG não agregantes foram isoladas em quantidade similar de todas as regiões. Essas moléculas apresentaram características polidispersas e migrando em torno de 70 e 200 kDa e exibindo um comportamento semelhante ao dos pequenos proteoglicanos decorin e biglican. A presença de decorin foi confirmada por immunoblotting. A análise do gel de agarose após a digestão com papaína mostrou a presença de dermatan sulfato nesses PGs. A presença de decorin e especialmente de biglican na fração D2 sugere que esses pequenos proteoglicanos podem interagir fortemente com proteoglicanos não agregantes de alto peso molecular. O imunoblotting para fibromodulina foi positivo para essas moléculas. Nenhuma diferença foi verificada em relação aos aspectos quantitativos, mas o tratamento com anti-fibromodulina também foi positivo para moléculas com 150 kDa. Essas moléculas desaparecem quando a amostra é tratada com agentes redutores. Esse fenômeno pode estar relacionado a autoagregação. A presença de FM agregado de 150 kDa foi mais proeminente na cartilagem articular da tíbia. Esses resultados indicam o efeito da estimulação mecânica nas diferentes regiões de uma mesma articulação. 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摘要

作用在滑膜关节上的机械力引起关节软骨组成和组织的变化。软骨细胞对细胞外基质的刺激有定量和定性的反应。在本研究中,我们调查了牛膝关节的5个不同区域的蛋白聚糖种群及其糖胺聚糖含量。采用超离心法(D1馏分)和凝胶过滤分离高密度PG群体。PG在所有区域的大小相似,但在胫骨,这些分子的mr较大。硫酸软骨素是D1部分中检测到的最突出的糖胺聚糖,其链约为40 KDa。从所有地区分离出两个数量相近的非聚集PG群体。这些分子表现出70和200 kDa左右的多分散和迁移特性,表现出与小蛋白多糖decorin和biglican相似的行为。免疫印迹证实了decorin的存在。木瓜蛋白酶消化后琼脂糖凝胶分析显示,这些PGs中存在硫酸皮素。decorin,特别是biglican在D2部分的存在表明这些小蛋白聚糖可以与高分子量的非聚集蛋白聚糖强烈相互作用。纤维调节蛋白的免疫印迹对这些分子呈阳性。定量方面没有差异,但抗纤维调节素治疗对150 kDa分子也呈阳性。当样品用还原剂处理时,这些分子就消失了。这种现象可能与自聚集有关。150 kDa FM聚集物在胫骨关节软骨中最为突出。这些结果表明机械刺激对同一关节不同区域的影响。在考虑基质组成与机械或化学刺激之间的关系时,必须记住软骨细胞对不同刺激敏感,并可能在同一关节的不同区域表现出异质性的代谢行为。
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POPULAÇÃO DE PROTEOGLICANOS EM DIFERENTES SÍTIOS ANATÔMICOS DA CARTILAGEM ARTICULAR DO JOELHO BOVINO
As forças mecânicas que atuam sobre uma articulação sinovial induzem alterações na composição e organização da cartilagem articular. Os condrócitos respondem a estímulos tanto de maneira quantitativa quanto qualitativa em relação à matriz extracelular. No presente estudo, foram investigados cinco regiões diferentes da articulação do joelho bovino em termos de populações de proteoglicanos e seu conteúdo de glicosaminoglicanos. A população de PG de alta densidade foi isolada por ultracentrifugação (fração D1) e filtração em gel. O PG apresentou tamanho semelhante em todas as regiões, porém na tíbia essas moléculas apresentam maior Mr. O sulfato de condroitina foi o glicosaminoglicano mais proeminente detectado na fração D1 e suas cadeias apresentaram em torno de 40 KDa. Duas populações de PG não agregantes foram isoladas em quantidade similar de todas as regiões. Essas moléculas apresentaram características polidispersas e migrando em torno de 70 e 200 kDa e exibindo um comportamento semelhante ao dos pequenos proteoglicanos decorin e biglican. A presença de decorin foi confirmada por immunoblotting. A análise do gel de agarose após a digestão com papaína mostrou a presença de dermatan sulfato nesses PGs. A presença de decorin e especialmente de biglican na fração D2 sugere que esses pequenos proteoglicanos podem interagir fortemente com proteoglicanos não agregantes de alto peso molecular. O imunoblotting para fibromodulina foi positivo para essas moléculas. Nenhuma diferença foi verificada em relação aos aspectos quantitativos, mas o tratamento com anti-fibromodulina também foi positivo para moléculas com 150 kDa. Essas moléculas desaparecem quando a amostra é tratada com agentes redutores. Esse fenômeno pode estar relacionado a autoagregação. A presença de FM agregado de 150 kDa foi mais proeminente na cartilagem articular da tíbia. Esses resultados indicam o efeito da estimulação mecânica nas diferentes regiões de uma mesma articulação. Ao considerar a relação existente entre a composição da matriz e estímulos mecânicos ou químicos, deve-se ter em mente que os condrócitos são sensíveis a diferentes estímulos e podem apresentar um comportamento metabólico heterogêneo em diferentes regiões de uma mesma articulação.
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