Construction of a chimaeric type 1/type 2 poliovirus by genetic recombination

Abstract

A chimaeric poliovirus carrying a type-2-specific neutralization epitope on a type 1 capsid was created by site-directed mutagenesis of the Mahoney strain of poliovirus type 1. An EcoRV and a HindIII restriction sites were first constructed in the cDNA of poliovirus type 1 at nucleotide positions 2756 and 2786, respectively, i.e. on either side of the sequence encoding neutralization epitope C3 (VP1 amino acids 93–103), which is part of neutralization site NImI. The cDNA sequence framed by the two sites was next taken out and replaced by custom-made oligonucleotides encoding the equivalent region of VP1 from the Lansing strain of polivirus type 2. The DNA from the plasmid carrying such a hybrid construct was transfected onto CV1 cells generating a chimaeric virus, v510. Neutralization of v510 with a panel of monoclonal antibodies showed that v510 has lost the poliovirus type 1 C3 epitope but acquired a new, poliovirus type-2-specific neutralization epitope. Preliminary results indicate that v510 also shows neurovirulence for mice, which is a specific trait of the Lansing strain of poliovirus type 2.

Pour créer un poliovirus chimère exprimant des épitopes de neutralisation du type 2 à la place de ceux d'une capside de type 1, on a créé, par mutagenèse dirigée à l'aide des oligonucléotides de synthèse voulus, un site EcoRV et un site HindIII en positions respectives 2.756 et 2.786 du cADN de la souche Mahoney de type 1. Ces deux sites encadrent la séquence de l'épitope C3 (acides aminés 93 à 103 de VP1) correspondant au site de neutralisation NImI de la capside du poliovirus. On a ensuite retiré la séquence ainsi encadrée, et on a inséré à sa place la région équivalente de la souche Lansing de type 2, sous form d'oligonucléotide de synthèse. On a ensuite transfecté des cellules CV1 avec le plasmide porteur du cADN hybride, générant ainsi un virus chimère, v510, dont la séroneutralisation par des anticorps monoclonaux montre qui'il a perdu l'épitope C3 du type 1 et acquis, à la place, un épitope de type 2. Des résultats préliminaires montrent que ce virus v510 a acquis aussi la neurovirulence pour la souris, caractéristique de la souche Lansing du type 2.