A Comparison between Methods of Identification and Serotyping of Encapsulated Strains of Haemophilus influenzae

Abstract

Seven methods of serotyping of Haemophilus influenzae were evaluated. Comparing slide agglutination, staphylococcal coagglutination, latex agglutination, counterimmunoelectrophoresis, immunofluorescence, capsular swelling, and cultivation on antiserum agar the commercial coagglutination test was most reliable, most rapid, and easiest to perform. To identify all six serotypes this coagglutination test had to be combined with slide agglutination. With most methods best results were achieved by using cultures incubated at 37°C for 6 h. As nonencapsulated strains often agglutinated unspecifically, selection of probably typeable strains was useful. Differentiation with help of colonial morphology and opalescent growth was facilitated by cultivation on Brain Heart Infusion (BHI) Chocolate Agar and testing of growth factor requirements on translucent BHI Agar with strips containing the growth factors V, X, and VX, respectively. In broth turbid growth was a hint for encapsulation. Nigrosin staining, a negative capsule staining, proved to be useful if specific antisera are not available.

From 252 clinical isolates of H. influenzae 216 were not typeable. 36 strains could be serotyped. 27 (75%) belonged to serotype b, 6 (16.6%) were serotype e, 3 (8.3%) were serotype f. Serotype e and f were most difficult to identify. Spectrum of patients and diseases were corresponding to the findings of other authors. Less well-known infections like cellulitis (erysipelas of the cheeks) and arthritis were observed, too. Rapid identification of at least H. influenzae type b could render treatment in some cases more effective by early application of a suitable antibiotic.

Sieben Methoden für die Serotypisierung von Haemophilus influenzae wurden erprobt. Beim Vergleich von Objektträgeragglutination, Staphylokokken-Koagglutination, Latexagglutination, Gegenstromimmunelektrophorese, Immunfluoreszenz, Kapselquellung und Kultivierung auf Antiserumagar erwies sich der kommerzielle Koagglutinationstest als am zuverlässigsten, schnellsten und am einfachsten durchzuführen. Um alle sechs Serotypen zu identifizieren, war bei diesem Koagglutinationstest eine Kombination mit der Objektträgeragglutination notwendig. Bei nahezu allen Methoden wurden beste Ergebnisse bei Verwendung von 6 h lang bei 37°C bebrüteten Kulturen erzielt. Da unbekapselte Stämme häufig unspezifisch agglutinierten, war eine Vorauswahl wahrscheinlich typisierbarer Stämme nützlich. Differenzierung anhand von Koloniemorphologie und -Opaleszenz wurde erleichtert durch Kultivierung auf Brain Heart Infusion (BHI) Chocolate Agar und Wuchsfak-tortestung auf klarem BHI-Agar mit Teststreifen für die Wuchsstoffe. Trübes Wachstum in Bouillon war ein Hinweis auf Bekapselung. Die Nigrosinfärbung, eine negative Kapseldarstellung, erwies sich als nützlich, wenn keine spezifischen Antiseren zur Verfügung standen.

Von 252 klinischen Isolaten von H. influenzae waren 216 nicht typisierbar. 36 Stämme konnten serotypisiert werden. 27 (75%) gehörten Serotyp b an, 6 (16.6%) waren Serotyp e, 3 (8.3%) waren Serotyp f. Stämme von Serotyp e und f waren am schwierigsten nachzuweisen. Hinsichtlich Patientengut und Krankheitsspektrum bestand übereinstimmung mit den Ergebnissen anderer Autoren. Auch weniger bekannte Infektionen wie Cellulitis (Wangenerysipel) und Arthritis wurden beobachtet. Die schnelle Typenbestimmung zumindest von H. influenzae Typ b könnte in einigen Fällen die Therapie durch frühzeitigen Einsatz eines geeigneten Antibiotikums effektiver machen.