Further characterization of haptoglobin binding to streptococci of serological group A

Abstract

Certain group A streptococci with surface antigen T 4 possess surface receptors for human haptoglobin (Hp). Binding of ¹²⁵I Hp 2-1 to two representative group A streptococcal cultures could be inhibited by unlabelled Hp 2-1, Hp 2-2 and Hp 1-1 but not by the a1, α² or β chains of Hp. Hp complexes formed with equine hemoglobin and asialo-Hp also reduced ¹²⁵I-Hp 2-1 binding to group A streptococci. Hp binding proteins could be solubilized from streptococcal surface by hot acid treatment of the bacteria and purified by subsequent affinity chromatography on human Hp 2-1 sepharose. The isolated Hp binding proteins specifically inhibited ¹²⁵I-Hp 2-1 binding to group A streptococci and retained their ¹²⁵I-Hp 2-1 binding activity in a dot binding assay on nitrocellulose membranes. SDS-PAGE and protein blots of Hp binding proteins developed with ¹²⁵I-labeled Hp 2-1 revealed numerous high molecular weight proteins with ¹²⁵I-Hp 2-1 binding activity.

Streptokokken der serologischen Gruppe A mit Oberflächenantigen T4 besaßen Bindungseigenschaften für Haptoglobin (Hp) vom Menschen. Die Bindung von I¹²⁵-Hp 2-1 an zwei repräsentative Streptokokkenkulturen der serologischen Gruppe A konnte durch unmarkiertes Hp 2-1, Hp 2-2 und Hp 1-1, nicht aber durch die Hp-Ketten α¹, α² oder β gehemmt werden. Komplexe von Hp mit Hämoglobin vom Pferd und Neuraminsäure-freies Hp führten ebenso zu einer Hemmung der Bindung von I¹²⁵-Hp 2-1. Hp-bindende Proteine der Streptokokkenoberfläche konnten durch Hitzeextraktion bei pH 2,0 abgelöst und durch anschließende Affinitätschromatographie an Hp 2-1-Sepharose gereinigt werden. Die isolierten Hp-bindenden Proteine hemmten spezifisch die Bindung von I¹²⁵-Hp 2-1 an Gruppe A-Streptokokken und wiesen auch in einem “Dot”-Bindungstest auf Nitrozellulosemembranen I¹²⁵-Hp 2-1-Bindungsaktivitäten auf. SDS-PAGE und “Protein blot” der Hp-bindenden Proteine ergaben zahlreiche hochmolekulare Proteine mit I¹²⁵-Hp-Bindungs-aktivität.