矢车菊甙-辣根过氧化物酶-过氧化氢新体系及其在酶联免疫传感分析中的应用
龚福春, 李定中, 杨荣, 魏建科, 曹忠, 谭淑珍, 谭亚非
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Abstract
以一种天然色素矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cyanidin-3-glucose, CAG)为辣根过氧化物酶(HRP)底物建立了矢车菊甙-辣根过氧化物酶-过氧化氢新体系. CAG在540 nm处有一个吸收峰( A P1 ), 在HRP催化下被H 2 O 2 氧化, A P1 降低; 同时, 其氧化产物在482 nm处产生一个新吸收峰( A P2 ), 并且反应体系中两峰值的比值 R ( A P2 / A P1 )与HRP量在一定浓度范围内呈线性相关.根据此原理, 以猪口蹄疫病毒蛋白(food and mouth disease virus antigen, FMDVAg)为分析模型, 建立了检测猪口蹄疫病毒的酶联免疫传感分析新方法. 该方法利用伴刀豆蛋白(Conconvalina, ConA)对糖蛋白的识别特性固定HRP-猪口蹄疫病毒抗体连接物(HRP-FMDVAb), 由ConA介导和磁性分离实现了免疫反应特异性组分和非特异成分, 以及反应免疫磁性珠与没反应免疫磁性珠的分离. 运用制备的传感体系测定猪口蹄疫病毒的线性范围为1.5×10 -8 ~2.7×10 -6 g/mL, 抗原检出限为3.1×10 -9 g/mL, 相对标准偏差为3.7%( n =11). 底物CAG及其产物的水溶性好, 对人体无毒副作用, 在临床上可代替传统HRP底物进行免疫检测.
矢车菊甙-辣根过氧化物酶-过氧化氢新体系及其在酶联免疫传感分析中的应用
以一种天然色素矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cyanidin-3-glucose, CAG)为辣根过氧化物酶(HRP)底物建立了矢车菊甙-辣根过氧化物酶-过氧化氢新体系. CAG在540 nm处有一个吸收峰( A P1 ), 在HRP催化下被H 2 O 2 氧化, A P1 降低; 同时, 其氧化产物在482 nm处产生一个新吸收峰( A P2 ), 并且反应体系中两峰值的比值 R ( A P2 / A P1 )与HRP量在一定浓度范围内呈线性相关.根据此原理, 以猪口蹄疫病毒蛋白(food and mouth disease virus antigen, FMDVAg)为分析模型, 建立了检测猪口蹄疫病毒的酶联免疫传感分析新方法. 该方法利用伴刀豆蛋白(Conconvalina, ConA)对糖蛋白的识别特性固定HRP-猪口蹄疫病毒抗体连接物(HRP-FMDVAb), 由ConA介导和磁性分离实现了免疫反应特异性组分和非特异成分, 以及反应免疫磁性珠与没反应免疫磁性珠的分离. 运用制备的传感体系测定猪口蹄疫病毒的线性范围为1.5×10 -8 ~2.7×10 -6 g/mL, 抗原检出限为3.1×10 -9 g/mL, 相对标准偏差为3.7%( n =11). 底物CAG及其产物的水溶性好, 对人体无毒副作用, 在临床上可代替传统HRP底物进行免疫检测.
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