Methodological approaches for assessment of platelet functional activity under the action of antiplatelet drugs

Abstract

Введение. Адекватный контроль функциональной активности тромбоцитов, в том числе при воздействии антиагре­гантных препаратов, является нерешенной проблемой лабораторной диагностики. К наиболее часто используемым методам определения функциональной активности тромбоцитов относятся оптическая агрегатометрия и проточная цитометрия. Цель исследования: оценить изменения функциональной активности тромбоцитов под влиянием антиагрегантных препаратов, используя методы оптической агрегатометрии и проточной цитометрии. Материалы и методы. В проспективном исследовании приняли участие 22 здоровые женщины фертильного возраста (26,0 ± 4,7 лет). Кровь отбирали из локтевой вены в вакутейнер с антикоагулянтом – цитратом натрия в соотношении кровь: антикоагулянт = 9:1. В качестве антиагрегантов использовали ацетилсалициловую кислоту (АСК) и эптифибатид. С помощью метода оптической агрегатометрии оцени­вали степень и скорость агрегации тромбоцитов (АТ). Методом проточной цитометрии оценивали экспрессию P-селектина (CD62P), гликопротеина GPIIb/IIIa (CD41а) и образование тромбоцитарно-лейкоцитарных комплексов. Результаты. Определение функциональной активности АДФ-индуцированных тромбоцитов под действием АСК выявило снижение скорости и степени их агрегационной активности и снижение уровня экспрессии CD41a и CD62P. При обработке тромбоцитов препаратом эптифибатид установлено увеличение экспрессии CD62P и CD41a и выраженное подавление скорости и степени АТ. Добавление АСК не оказывало заметного влияния на АДФ-индуцированное образование комплексов тромбоцитов с лейко­цитами. Напротив, в присутствии эптифибатида наблюдали более интенсивную АТ с лейкоцитами. Заключение. Оценку функциональной активности тромбоцитарного звена гемостаза необходимо проводить с учетом всех этапов активации тромбоцитов и их участия в межклеточных взаимодействиях. Расширение подходов к оценке эффективности антиагрегантной терапии лабораторными методами имеет большое значение для поиска безопасных и эффективных методов лечения пациентов с тромбофилическими состояниями на различных этапах их развития. Background. Adequate control of platelet functional activity, including exposure to antiplatelet drugs, is an unresolved problem in laboratory diagnostics. Optical aggregation and flow cytometry are the most commonly used methods for determining of platelet functional activity. Objective: to assess changes in platelet functional activity under the influence of antiplatelet drugs using optical aggregation and flow cytometry methods. Patients/Methods. The prospective study involved 22 healthy women of fertile age (26.0 ± 4.7 years). Blood was taken from the cubital vein into a vacutainer with an anticoagulant – sodium citrate in ratio blood: anticoagulant = 9:1. Acetylsalicylic acid (ASA) and eptifibatide were used as antiplatelet agents. The degree and rate of platelet aggregation (РA) were accessed by optical aggregation. Flow cytometry was used to assess the expression of P-selectin (CD62P), glycoprotein GPIIb/IIIa (CD41a) and the formation of platelet-leukocyte complexes. Results. Determination of the functional activity of ADP-induced platelets under ASA action revealed a decrease in the rate and degree of РA activity and a decrease in the level of CD41a and CD62P expression. Platelet processing with eptifibatide caused an increase of CD62P and CD41a expression anda pronounced suppression of РA rate and degree. ASA addition had no significant effect on ADP-induced formation of platelet-leukocyte complexes. On the contrary, more intense РA with leukocytes was observed in the presence of eptifibatide. Conclusions. Assessment of platelet functional activity should take into account all stages of platelet activation and their participation in intercellular interactions. Expansion of approaches for assessing of antiplatelet therapy effectiveness by laboratory methods is of great importance for searching safe and effective methods of treating patients with thrombophilic conditions at various stages of their development.