Mise au point et validation d’une méthode de dosage simultané de la morphine et de ses métabolites glucuronoconjugués totaux par chromatographie liquide d’interactions hydrophiles

Objectif: Dans le cadre d’une etude experimentale de redistribution post-mortem des xenobiotiques menee chez le lapin, une methode de dosage simultane de la morphine et de ses metabolites glucuronoconjugues totaux dans des echantillons de sang total de faible volume a ete developpee. Methode: Les etalons internes deuteres sont ajoutes a une prise d’essai de 100 μL. La preparation des echantillons consiste en l’extraction liquide-solide sur des cartouches Oasis ® HLB (Waters ® , Saint-Quentin-en-Yvelines, France). L’analyse est menee par chromatographie liquide haute performance couplee a la spectrometrie de masse en mode d’ionisation electrospray. Les composes d’interet sont elues par chromatographie liquide d’interactions hydrophiles au travers d’une colonne Luna ® HILIC – 150 mm × 2,0 mm × 3 μm (Phenomenex ® , Le Pecq, France). La methode de dosage est validee selon le concept de l’erreur totale a l’aide du logiciel e-noval ® (Chemcad, Obernai, France). Resultats: Les fonctions de reponse sont de type quadratique non pondere. Les resultats sont lineaires sur l’ensemble de l’intervalle de dosage des analytes soit de 10 a 300 ng/mL pour la morphine et de 750 a 10000 ng/mL pour ses metabolites glucuronoconjugues totaux. La limite de detection estimee est de 3,5 ng/mL pour la morphine et de 250 ng/mL pour ses metabolites glucuronoconjugues totaux. Les incertitudes de mesure sont respectivement de 15 % et de 9 %. Conclusion: L’extraction liquide-solide sur cartouches Oasis ® HLB et la chromatographie liquide d’interactions hydrophiles, adaptees a la separation des molecules polaires, ont permis de mettre au point une methode de dosage simultane de la morphine et de ses metabolites glucuronoconjugues totaux sur de faibles volumes d’echantillons.