T. M. S. Rocha, Antonio A. L. T. Jr, A. L. Neto, Denner R. D. Duarte, Juliana M. da G. R. do Carmo, T. B. M. Sobrinho, G. E. B. Silva
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Foi realizada a extração de DNA tumoral por meio do kit QIAmp DNA FFPE Tissue (Qiagen) a partir de tecido parafinado. Em seguida, o DNA extraído foi utilizado para detecção molecular do HPV por PCR qualitativa tipo nested, utilizando os primers PGMY09/11 e GP5+/GP6+ e β-globina como controle de viabilidade. Os amplicons foram avaliados em gel de agarose a 1,5% e considerados positivos aqueles que apresentaram positividade para β-globina, PGMY e/ou GP. A expressão de p53 foi realizada por imuno-histoquímica, utilizando anticorpo anti-p53 (clone DO-7) e kit específico EnVision™ (Dako). A maioria dos pacientes tinham idade >60 anos, baixa escolaridade (37%), tabagistas (38,5%), etilistas (24%) e com fimose (39,5%). Todos os casos realizaram procedimento cirúrgico, sendo a penectomia parcial a mais adotada (75,5%). A presença de DNA de HPV foi observada em 80,5% dos casos avaliados. Houve ausência de expressão de p53 em 47,5% de acordo com os critérios de Lopes e colaboradores (2002). 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摘要
maranhao州是巴西和世界上阴茎癌发病率最高的州。以前的研究描述了该地区人类乳头瘤病毒(HPV)感染肿瘤的高患病率,这是该病的一个重要危险因素。HPV的致癌潜力主要归因于E7和E6癌蛋白的作用,后者作用于肿瘤抑制蛋白p53的调控。因此,本研究的目的是研究阴茎肿瘤中p53蛋白的表达谱。本研究由HUUFMA研究伦理委员会批准,意见nº3.122.045。对maranhao (HUUFMA和HCAB)两家医院诊断为阴茎癌的病例进行了调查。采用QIAmp DNA FFPE组织试剂盒(Qiagen)从石蜡组织中提取肿瘤DNA。然后,利用引物PGMY09/11、GP5+/GP6+和β-珠蛋白作为活力控制,采用巢式定性PCR方法对HPV进行分子检测。用1.5%琼脂糖凝胶检测扩增子,β-珠蛋白、PGMY和/或GP阳性的扩增子被认为是阳性的。采用抗p53抗体(DO-7克隆)和特异性试剂盒EnVision™(Dako)免疫组化检测p53表达。大多数患者年龄>60岁,受教育程度低(37%),吸烟(38.5%),酗酒(24%)和包茎(39.5%)。所有病例均行手术,部分阴茎切除术最常见(75.5%)。在80.5%的评估病例中观察到HPV DNA的存在。根据Lopes和合作者(2002)的标准,47.5%的p53缺失。这项研究的结果证实了在阴茎癌中观察到的不利的社会人口学特征,特别是在maranhao中,HPV感染的高患病率,并描述了p53在局部病例中的表达谱,揭示了在诊断和预后疾病方面的潜在用途。
ANÁLISE DA EXPRESSÃO IMUNO-HISTOQUÍMICA DA PROTEÍNA P53 EM PACIENTES COM C NCER DE PÊNIS
O estado do Maranhão possui a maior incidência de câncer de pênis no Brasil e no mundo. Estudos prévios descrevem alta prevalência de tumores infectados pelo papilomavírus humano (HPV) na região, um importante fator de risco para a doença. O potencial oncogênico do HPV é atribuído principalmente à ação das oncoproteínas E7 e E6, esta última atuando na desregulação da proteína supressora tumoral p53. Diante disso, o objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil de expressão proteica de p53 em tumores de pênis. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do HUUFMA, parecer nº 3.122.045. Foi realizado levantamento de casos diagnosticados com câncer de pênis em dois hospitais no Maranhão (HUUFMA e HCAB). Foi realizada a extração de DNA tumoral por meio do kit QIAmp DNA FFPE Tissue (Qiagen) a partir de tecido parafinado. Em seguida, o DNA extraído foi utilizado para detecção molecular do HPV por PCR qualitativa tipo nested, utilizando os primers PGMY09/11 e GP5+/GP6+ e β-globina como controle de viabilidade. Os amplicons foram avaliados em gel de agarose a 1,5% e considerados positivos aqueles que apresentaram positividade para β-globina, PGMY e/ou GP. A expressão de p53 foi realizada por imuno-histoquímica, utilizando anticorpo anti-p53 (clone DO-7) e kit específico EnVision™ (Dako). A maioria dos pacientes tinham idade >60 anos, baixa escolaridade (37%), tabagistas (38,5%), etilistas (24%) e com fimose (39,5%). Todos os casos realizaram procedimento cirúrgico, sendo a penectomia parcial a mais adotada (75,5%). A presença de DNA de HPV foi observada em 80,5% dos casos avaliados. Houve ausência de expressão de p53 em 47,5% de acordo com os critérios de Lopes e colaboradores (2002). Os resultados desta pesquisa ratificam um perfil sociodemográfico desfavorável observado em câncer de pênis, especialmente no Maranhão, com a alta prevalência de infecção por HPV e descreve o perfil de expressão de p53 na casuística local, revelando potencial uso no diagnóstico e prognóstico da doença.