P53蛋白在阴茎癌患者中的免疫组化表达分析

T. M. S. Rocha, Antonio A. L. T. Jr, A. L. Neto, Denner R. D. Duarte, Juliana M. da G. R. do Carmo, T. B. M. Sobrinho, G. E. B. Silva
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Foi realizada a extração de DNA tumoral por meio do kit QIAmp DNA FFPE Tissue (Qiagen) a partir de tecido parafinado. Em seguida, o DNA extraído foi utilizado para detecção molecular do HPV por PCR qualitativa tipo nested, utilizando os primers PGMY09/11 e GP5+/GP6+ e β-globina como controle de viabilidade. Os amplicons foram avaliados em gel de agarose a 1,5% e considerados positivos aqueles que apresentaram positividade para β-globina, PGMY e/ou GP. A expressão de p53 foi realizada por imuno-histoquímica, utilizando anticorpo anti-p53 (clone DO-7) e kit específico EnVision™ (Dako). A maioria dos pacientes tinham idade >60 anos, baixa escolaridade (37%), tabagistas (38,5%), etilistas (24%) e com fimose (39,5%). Todos os casos realizaram procedimento cirúrgico, sendo a penectomia parcial a mais adotada (75,5%). A presença de DNA de HPV foi observada em 80,5% dos casos avaliados. Houve ausência de expressão de p53 em 47,5% de acordo com os critérios de Lopes e colaboradores (2002). 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摘要

maranhao州是巴西和世界上阴茎癌发病率最高的州。以前的研究描述了该地区人类乳头瘤病毒(HPV)感染肿瘤的高患病率,这是该病的一个重要危险因素。HPV的致癌潜力主要归因于E7和E6癌蛋白的作用,后者作用于肿瘤抑制蛋白p53的调控。因此,本研究的目的是研究阴茎肿瘤中p53蛋白的表达谱。本研究由HUUFMA研究伦理委员会批准,意见nº3.122.045。对maranhao (HUUFMA和HCAB)两家医院诊断为阴茎癌的病例进行了调查。采用QIAmp DNA FFPE组织试剂盒(Qiagen)从石蜡组织中提取肿瘤DNA。然后,利用引物PGMY09/11、GP5+/GP6+和β-珠蛋白作为活力控制,采用巢式定性PCR方法对HPV进行分子检测。用1.5%琼脂糖凝胶检测扩增子,β-珠蛋白、PGMY和/或GP阳性的扩增子被认为是阳性的。采用抗p53抗体(DO-7克隆)和特异性试剂盒EnVision™(Dako)免疫组化检测p53表达。大多数患者年龄>60岁,受教育程度低(37%),吸烟(38.5%),酗酒(24%)和包茎(39.5%)。所有病例均行手术,部分阴茎切除术最常见(75.5%)。在80.5%的评估病例中观察到HPV DNA的存在。根据Lopes和合作者(2002)的标准,47.5%的p53缺失。这项研究的结果证实了在阴茎癌中观察到的不利的社会人口学特征,特别是在maranhao中,HPV感染的高患病率,并描述了p53在局部病例中的表达谱,揭示了在诊断和预后疾病方面的潜在用途。
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ANÁLISE DA EXPRESSÃO IMUNO-HISTOQUÍMICA DA PROTEÍNA P53 EM PACIENTES COM C NCER DE PÊNIS
O estado do Maranhão possui a maior incidência de câncer de pênis no Brasil e no mundo. Estudos prévios descrevem alta prevalência de tumores infectados pelo papilomavírus humano (HPV) na região, um importante fator de risco para a doença. O potencial oncogênico do HPV é atribuído principalmente à ação das oncoproteínas E7 e E6, esta última atuando na desregulação da proteína supressora tumoral p53. Diante disso, o objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil de expressão proteica de p53 em tumores de pênis. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do HUUFMA, parecer nº 3.122.045. Foi realizado levantamento de casos diagnosticados com câncer de pênis em dois hospitais no Maranhão (HUUFMA e HCAB). Foi realizada a extração de DNA tumoral por meio do kit QIAmp DNA FFPE Tissue (Qiagen) a partir de tecido parafinado. Em seguida, o DNA extraído foi utilizado para detecção molecular do HPV por PCR qualitativa tipo nested, utilizando os primers PGMY09/11 e GP5+/GP6+ e β-globina como controle de viabilidade. Os amplicons foram avaliados em gel de agarose a 1,5% e considerados positivos aqueles que apresentaram positividade para β-globina, PGMY e/ou GP. A expressão de p53 foi realizada por imuno-histoquímica, utilizando anticorpo anti-p53 (clone DO-7) e kit específico EnVision™ (Dako). A maioria dos pacientes tinham idade >60 anos, baixa escolaridade (37%), tabagistas (38,5%), etilistas (24%) e com fimose (39,5%). Todos os casos realizaram procedimento cirúrgico, sendo a penectomia parcial a mais adotada (75,5%). A presença de DNA de HPV foi observada em 80,5% dos casos avaliados. Houve ausência de expressão de p53 em 47,5% de acordo com os critérios de Lopes e colaboradores (2002). Os resultados desta pesquisa ratificam um perfil sociodemográfico desfavorável observado em câncer de pênis, especialmente no Maranhão, com a alta prevalência de infecção por HPV e descreve o perfil de expressão de p53 na casuística local, revelando potencial uso no diagnóstico e prognóstico da doença.
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