Expression of CaMV ORF IV in Escherichia coli

A CaMV DNA fragment corresponding to nucleotides 2200–3992 and including the coding sequence (2200–3670) of open reading frame IV was inserted in the pTG908 prokaryotic expression vector. In the recombinant pTG-IV plasmid, ORF IV, which codes for the coat protein precursor, was fused to the N-terminal coding sequence of the λCII gene, which is under transcriptional control of the λPL promoter. The expected fusion protein CII-ORF IV had a calculated molecular weight of 58.4 Kd. Nevertheless, temperature induction of the PL promoter resulted in synthesis of a major 76-Kd fusion protein: the coat protein precursor migrated abnormally on SDS polyacrylamide gel.

Un fragment d'ADN de CaMV (nt 2200 à 3992) comprenant la phase ouverte de lecture du gène IV (nt 2200 à 3670) a été cloné dans le plasmide pTG908, un vecteur d'expression procaryotique. Dans le plasmide recombinant (pTG-IV), le gène IV, codant pour le précurseur des protéines de coque, est fusionné à la séquence N-terminale codante du produit du gène CII de λ, placé sous contrôle transcriptionnel du promoteur PL de λ. La protéine de fusion CII-ORF IV a un poids moléculaire théorique de 58,4 Kd. Après induction du promoteur PL, une protéine de fusion de 76 Kd est synthétisée: le produit du gène IV a une migration ralentie en gel de polyacrylamide dénaturant.