Structural study of adenovirus type 2 fibre using anti-fibre and anti-peptide sera

Peptides corresponding to the N- and C-extremities of the adenovirus 2 fibre polypeptide were synthesized, coupled to tetanus toxoid and injected into rabbits. Two sera were obtained: the anti-N_TT serum and the anti-C_TT serum. These sera and an anti-native-fibre serum were used to study fragments generated by hydrochloric acid cleavage of the fibre. The 44-Kd fragment corresponding to the 2/3 N-terminal part of the molecule retained its antigenic reactivity. This is consistent with a shaft structure for this part of the fibre. The anti-peptide sera were used to orientate the fibre, i.e., to determine the site of anchorage of this protein in the penton base. First, immunorevelation of blots of enzymatic digests of native or dissociated penton suggested that the N-extremity of the fibre was involved in the assembly of this protein in the penton base. Second, attempts were made to determine the accessibility of the fibre ends in the penton structure by ELISA assays and by immunorevelation of penton in Western blots. The results agreed with the proposed orientation derived from study of the enzymatic digests. Since the 2 anti-peptide sera and the peptides were unable to affect viral adsorption, it was not possible to determine how the fibre is orientated with respect to the cell receptor. However, the anti-peptide sera were found to inhibit viral production slighty.

Deux peptides correspondant aux extrémités N- et C-terminales de la fibre de l'adénovirus type 2 ont été synthétisés puis couplés, grâce au glutaraldéhyde, sur l'anatoxine tétanique et injectés à des lapins. Deux sérums ont ainsi été obtenus: les sérums anti-N_TT et anti-C_TT. Ils ont été utilisés pour des études structurales de la fibre. Le peptide N-terminal est révélé par le sérum antifibre, ce qui suggère une antigénicité naturelle de cette extrémité. Ces sérums ont permis d'identifier les fragments engedrés par le clivage chimique de la fibre à l'acide chlorhydrique et de montrer ainsi (1) la spécificité des sérums et (2) l'existence d'une structure antigénique hautement résistante et correspondant à un fragment de 44 Kd contenant les 2/3 N-terminaux de la fibre; cela est en accord avec une structure en bâtonnet pour cette zone de la fibre.

Les immunsérums ont aussi été utilisés pour déterminer l'orientation de la fibre, c'est-à-dire le site d'ancrage de cette protéine dans la base du penton, et cela grâce à des cinétiques de digestion enzymatique du penton qui montrent que l'extrémité N-terminale de la fibre est plus rapidement digérée lorsque cette protéine est dissociée de la base du penton. L'accessibilité des extrémités de la fibre a pu être définie (1) par des révélations du penton natif ou dissocié en test ELISA et (2) par des immunotransferts. Les résultats de ces expériences sont compatibles avec l'existence d'une liaison à la base du penton grâce à l'extrémité N-terminale de la fibre. Enfin, les deux sérums et les peptides correspondant se sont révélés incapables de perturber l'adsorption virale. La fibre n'a donc pas pu être orientée vis-à-vis de son récepteur cellulaire. Cependant, les sérums dirigés contre les peptides inhibent légèrement la production virale.