[Investigation of Virulence Genes in Campylobacter Species Isolated from Patients with Acute Diarrhea].

Abstract

Akut gastroenterit dünya genelinde en yaygın enfeksiyon hastalıklarından biridir. Bu hastalıklar gelişmekte olan ülkelerde çocuk ölümlerine ve ciddi ekonomik kayıplara neden olmuştur. Hastalık genellikle yaygın diyare şeklinde kendini gösterse de bazı olgularda şiddetli enfeksiyon belirtilerine, hatta ölümlere neden olmuştur. Bu çalışmada, gastroenterit şikayetiyle hastaneye başvurmuş hastalardan alınan gaita örneklerinden izole edilen Campylobacter türlerinin tanımlanması, virülans genlerinin polimeraz zincir reaksiyonu [polymerase chain reaction (PCR)] ile araştırılması amaçlanmıştır. Campylobacter sıklığının tespiti için gastroenterit şüphesi olan 850 hasta örneği çalışmaya dahil edilmiştir. Campylobacter izolasyonu için dışkı örnekleri modifiye charcoal sefoperazon deoksikolat agar besiyerine ekilip 42 °C'de 48-72 saat mikroaerofilik şartlarda inkübasyona bırakılmıştır. Campylobacter şüpheli kolonilere katalaz, oksidaz ve Gram boyama yapılmıştır. Dışkıların makroskobik incelemesinde dışkının kıvamı, mukus durumu ve lökosit varlığı araştırılmıştır. DNA izolasyonu taze üreyen kolonilerden ticari QIAampDNA mini kit (Qiagen, Almanya) protokolüne göre yapılmıştır. Bakterilerin tanımlanması ve virülans genlerinin varlığı PCR ile araştırılmıştır. Campylobacter cinsi izolatların moleküler olarak tanımlanmasında 16S rRNA genine spesifik 816 baz çifti (bp) uzunluğundaki C412F ve C1228R primer çifti kullanılmıştır. Campylobacter jejuni'nin hippurase genine spesifik olan 735 bp uzunluğundaki HipO1 ve HipO2 primer çifti kullanılmıştır. Campylobacter coli'nin ise asperkinase genine özel 500 bp uzunluğundaki CC1 ve CC2 primerleri kullanılmıştır. Çalışmada incelenen 850 örneğin 122'sinde Campylobacter spp. üremesi tespit edilmiştir. Pozitif örneklerin 107 (%87.7)'si poliklinik hastalarından, 15 (%12.3)'i ise serviste yatan hastalardan izole edilmiştir. Hastaların yaş grubuna göre dağılımı incelendiğinde en yüksek oranda pozitiflik %39.4 (48) ile 0-5 yaş arasındaki çocuklarda saptanmıştır. PCR ile bu izolatların 106'sı C.jejuni, 11'i C.coli ve beşi Campylobacter spp. olarak tanımlanmıştır. Campylobacter izolatlarının 102 (%83.6)'sinde ciaB geni, 93 (%76.2)'ünde dnaJ geni, 106 (%86.8)'sında cdtC geni ve 115 (94.2%)'inde cdtA geni tespit edilmiştir. cdtB, pldA ve cadF genleri sırasıyla 110 (%90.1), 85 (%69.6) ve 110 (%90.1) izolatta pozitif olarak tespit edilmiştir. Virülans genlerinin türlere göre dağılımına bakıldığında; cadF geninin C.coli izolatlarının hepsinde bulunduğu, cdtA ve ciaB genlerinin diğer Campylobacter spp. izolatlarının tamamında saptandığı tespit edilmiştir. C.jejuni izolatlarının 68'inde, C.coli izolatlarının üçünde, Campylobacter spp. izolatlarının birinde tüm genler pozitif saptanmıştır. Çalışmadaki veriler Campylobacter'in akut gastroenterit hastalıklarında yüksek oranda saptandığını göstermiştir. Bu çalışmanın, klinisyenlerin Campylobacter enfeksiyonlarına olan yaklaşımında yardımcı olacağı düşünülmektedir.