Annales de l'Institut Pasteur. Virology最新文献

La fréquence relative des sous-groupes de rotavirus humains a été étudiée en relation avec l'électrophorétype de 268 rotavirus trouvés dans les selles d'enfants japonais atteints de gastroentérite aigu entre janvier 1986 et juin 1987. La quasi-totalité des échantillons (265/268, 99%) contient des rotavirus du sous-groupe I avec un modèle «courtå (5%) ou du sous-groupe II avec un modèle «longå (94%). Récemment nous avions mis en évidence un nouveau rotavirus du sous-groupe I (sérotype 3) avec un ARN de modèle «longå (AU-1) et cette souche a été considérérée comme étant un rotavirus animal transmis à un humain. Dans cette étude nous avons isolé une seconde souche (AU228) qui a ces nouvelles caractéristiques. La souche AU228 isolée 5 ans après la découverte de la souche AU-1, a un électrophorétype semblable mais distinct de celui de la souche AU-1. De telles souches pourraient procurer une piste pour l'élucidation des interactions possibles entre les rotavirus humains et animaux.

Radioactively labelled RNA transcripts made in vitro of various fragments from cDNA clones of poliovirus type 1 and of hepatitis A virus under the control of bacteriophage T7 or SP6 promoters have been evaluated for diagnostic purposes. The RNA transcripts were 2 orders of magnitude more sensitive as hybridization probes than corresponding cDNA preparations labelled by the nick translation procedure.

A combination of hybridization analysis and sequence comparison showed that some regions of the genome of a number of enteroviruses are highly conserved, while others show very little homology; the general order of conservation is: 5′-non-coding>3′-terminal>central (2C)>VP3>VP1.

The 350 bases of the poliovirus VP1 region were highly specific for that virus, while the 450-bases of the 5′NC region showed extensive cross-reaction with other enteroviruses. However, these probes did not hybridize with HAV, which was detected only by HAV-specific riboprobes.

The transcripts have been successfully applied as hybridization probes in diagnostic tests on supernatants of infected cell culture lysates and in clinical samples, mainly in stool extracts.

Les ARN marqués transcrits des différents fragments de l'ADNc cloné du poliovirus type 1 et du virus de l'hépatite A (HAV) in vitro, sous le contrôle de promoteur du phage SP6 ou du phage T7, ont été évalués dans le diagnostic des entérovirus.

Les ARN transcrits sont 100 fois plus sensibles comme sondes dans les hybridations moléculaires que les ADNc correspondants marqués par la translation de coupure.

La comparaison d'hybridation avec des données de séquences a montré que certaines régions génomiques de différents picornavirus sont hautement conservées alors que d'autres régions ont très peu d'homologies. On a pu établir l'ordre général de conservation de 5 régions sous-génomiques: 5′-non-codante (5′NC)>3′-terminale>région centrale (2C)>VP3>VP1.

Les 350 bases de la région VP1 du poliovirus sont spécifiques de ce virus; les 450 bases de la région 5′NC montrent une forte hybridation croisée avec d'autres entérovirus. Aucune de ces sondes n'hybride avec le virus de l'hépatite A; ce virus a été détecté seulement avec les ribosondes transcrites de l'ADNc de HAV.

Les transcrits ont été des sondes sensibles dans les hybridations avec des surnageants des lysats des cellules infectées et même dans les spécimens cliniques, surtout avec des surnageants de selles. Nous proposons l'utilisation de ces ribosondes pour le diagnostic des entérovirus, comme une technique rapide, sensible et spécifique.

A cohort of 111 children born in Bangui (Central African Republic) was followed from birth to two years of age for rotavirus infections by biweekly stool investigations until six months of age, as well as at each diarrhoeic episode. Thirty-eight children (34.2%) exhibited at least one rotavirus infection by the age of 6 months. Thirty children (27%) presented with rotavirus associated diarrhoea before 2 years of age. Until the children reached the age of 12 months, rotavirus was identified significantly more frequently in diarrhoeic stools than in non-diarrhoeic stools (p<0.001). A low diversity of characterized rotavirus strains was found; only two electrophoretypes were identified, and 91% of the strains belonged to subgroup II, serotype 1, with no special strain identified in newborns. A total of 38 children had a rotavirus infection before the age of six months, while 73 did not: only 2.6% of the first group had diarrhoea associated with rotavirus between 6 and 24 months, versus 20.5% in the second group (p<0.05). In two-thirds of the cases of infection, the presence of rotavirus in stools was detected only once; repetitive isolations were more frequent in diarrhoeic than in asymptomatic infections. The isolation rate of rotavirus in the general populations was found to be very low (0.2%).

Les infections à rotavirus ont été suivies dans une cohorte de 111 enfants nés à Bangui (République Centrafricaine), de leur naissance à deux ans, par un examen des selles effectué deux fois par semaine pendant les premiers six mois ainsi qu'à chaque épisode diarrhéique. Trente-huit enfants (34,2%) ont eu au moins une infection à rotavirus avant l'âge de six mois. Trente enfants (27%) ont eu une diarrhée avec rotavirus avant l'âge de deux ans. Chez les enfants de moins de un an, les rotavirus ont été plus fréquemment identifiés de façon significative dans les selles diarrhéiques que dans les non diarrhéiques (p<0,001). La caractérisation des souches de rotavirus isolées a montré que la diversité est faible. Deux électrophorétypes ont été identifiés, et 91% des souches sont du sous-groupe II, sérotype 1, les souches isolées chez les enfants nouveau-nés étant les mêmes que chez les plus âgés.

Trente-huit enfants ont eu une infection à rotavirus avant l'âge de 6 mois et soixante-treize n'en ont pas eu; 2,6% seulement des enfants du premier groupe ont eu une diarrhée à rotavirus entre 6 et 24 mois, contre 20,5% des enfants du deuxième groupe (p<0,05). Dans les deux tiers des cas d'infection, les rotavirus ont été identifiés une fois seulement dans les selles; des isolements répétés ont étés plus fréquents au cours des infections avec diarrhée qu'au cours des infections asymptomatiques. Le taux de prévalence des rotavirus dans la population générale a été trouvé très bas (0,2%).

A CaMV DNA fragment corresponding to nucleotides 2200–3992 and including the coding sequence (2200–3670) of open reading frame IV was inserted in the pTG908 prokaryotic expression vector. In the recombinant pTG-IV plasmid, ORF IV, which codes for the coat protein precursor, was fused to the N-terminal coding sequence of the λCII gene, which is under transcriptional control of the λPL promoter. The expected fusion protein CII-ORF IV had a calculated molecular weight of 58.4 Kd. Nevertheless, temperature induction of the PL promoter resulted in synthesis of a major 76-Kd fusion protein: the coat protein precursor migrated abnormally on SDS polyacrylamide gel.

Un fragment d'ADN de CaMV (nt 2200 à 3992) comprenant la phase ouverte de lecture du gène IV (nt 2200 à 3670) a été cloné dans le plasmide pTG908, un vecteur d'expression procaryotique. Dans le plasmide recombinant (pTG-IV), le gène IV, codant pour le précurseur des protéines de coque, est fusionné à la séquence N-terminale codante du produit du gène CII de λ, placé sous contrôle transcriptionnel du promoteur PL de λ. La protéine de fusion CII-ORF IV a un poids moléculaire théorique de 58,4 Kd. Après induction du promoteur PL, une protéine de fusion de 76 Kd est synthétisée: le produit du gène IV a une migration ralentie en gel de polyacrylamide dénaturant.