Pub Date : 2024-04-01DOI: 10.1016/j.rmr.2024.02.010
M. Moreau , A. Madani , R. Dard , T. Bourgeois , M.-P. d’Ortho , C. Delclaux , N. Janel , B. Matrot
Le syndrome de Down (SD), ou trisomie 21, est une maladie génétique due à la présence d’une copie supplémentaire du chromosome 21, entraînant diverses caractéristiques physiques ainsi que des retards de développement et des déficits cognitifs. Le syndrome d’apnées obstructives du sommeil (SAOS) est un trouble fréquent chez les patients adultes et enfants atteints du SD. Plusieurs caractéristiques retrouvées dans le SD peuvent contribuer au développement du SAOS ou l’aggraver. De nombreux modèles murins de SD existent. Quelques études ont exploré les apnées et le risque d’obstruction des voies aériennes supérieures dans ces modèles mais exclusivement à l’âge adulte.
Down syndrome (DS), or trisomy 21, is a genetic disorder caused by the presence of an extra copy of chromosome 21, leading to various characteristic physical features as well as developmental and cognitive delays. Obstructive sleep apnea syndrome (OSAS) is a common disorder in both adult and pediatric patients with DS. Several characteristics of DS may contribute to the development or worsening of OSAS. Numerous murine models of DS exist. A number of studies have explored apneas and the risk of upper airway obstruction in these models, but up until now, only in adulthood.
{"title":"Utilisation des modèles murins pour l’étude du syndrome d’apnées obstructives du sommeil dans le syndrome de Down","authors":"M. Moreau , A. Madani , R. Dard , T. Bourgeois , M.-P. d’Ortho , C. Delclaux , N. Janel , B. Matrot","doi":"10.1016/j.rmr.2024.02.010","DOIUrl":"10.1016/j.rmr.2024.02.010","url":null,"abstract":"<div><p>Le syndrome de Down (SD), ou trisomie 21, est une maladie génétique due à la présence d’une copie supplémentaire du chromosome 21, entraînant diverses caractéristiques physiques ainsi que des retards de développement et des déficits cognitifs. Le syndrome d’apnées obstructives du sommeil (SAOS) est un trouble fréquent chez les patients adultes et enfants atteints du SD. Plusieurs caractéristiques retrouvées dans le SD peuvent contribuer au développement du SAOS ou l’aggraver. De nombreux modèles murins de SD existent. Quelques études ont exploré les apnées et le risque d’obstruction des voies aériennes supérieures dans ces modèles mais exclusivement à l’âge adulte.</p></div><div><p>Down syndrome (DS), or trisomy 21, is a genetic disorder caused by the presence of an extra copy of chromosome 21, leading to various characteristic physical features as well as developmental and cognitive delays. Obstructive sleep apnea syndrome (OSAS) is a common disorder in both adult and pediatric patients with DS. Several characteristics of DS may contribute to the development or worsening of OSAS. Numerous murine models of DS exist. A number of studies have explored apneas and the risk of upper airway obstruction in these models, but up until now, only in adulthood.</p></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"41 4","pages":"Pages 279-282"},"PeriodicalIF":0.6,"publicationDate":"2024-04-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"140068641","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2024-03-01DOI: 10.1016/j.rmr.2024.01.077
N. Worbe , M. Brollo , P. Devillier , H. Salvator , A. Magnan , Q. Marquant , C. Tchérakian
<div><h3>Introduction</h3><p>Les pneumopathies interstitielles diffuses (PID) sont des pathologies rares d’étiologies variées menant pour la plupart à la fibrose pulmonaire. Sur une cohorte de 220 atteints de PID fibrosantes suivis à l’hôpital Foch, 58 présentaient un taux de polynucléaires à éosinophiles (PNE) sanguin<!--> <!-->><!--> <!-->300/mm<sup>3</sup> considéré comme élevé <span>[1]</span>. Bien que le rôle des PNE dans le développement et/ou l’exacerbation des PID ait été fortement suggéré <span>[2]</span>, il n’a jamais été démontré. Nous émettons l’hypothèse que les PNE jouent un rôle dans la physiopathologie des PID. Afin de la vérifier, le projet INTREPID propose de caractériser les médiateurs de l’immunité de type 2 (cellulaires et solubles) chez 60 patients atteints de PID, en fonction de leur taux de PNE sanguin et de contrôler le caractère pro-fibrosant de leurs PNE in vitro. Les résultats présentés sont issus de la mise au point du modèle in vitro réalisés sur des volontaires sains.</p></div><div><h3>Méthodes</h3><p>Les PNE ont été isolés du sang de donneurs sains puis mis en culture, après vérification de leur pureté par cytométrie de flux CytoFlex SRT. Leur viabilité a été vérifiée par dosage de la lactate déshydrogénase (LDH) après 48<!--> <!-->h de culture. Les PNE ont été mis en coculture avec des lignées épithéliales bronchiques et alvéolaires (respectivement les cellules BEAS-2B et A549) en interface liquide-liquide et air-liquide. Les cytokines (IL-6, CXCL8, CCL5 et CCL2) ont été dosées par ELISA et une mesure de la résistance transépithéliale (TEER) a été effectuée. Les expectorations induites de sujets sains ont été analysées par cytométrie de flux et par coloration MGG afin d’étudier les différentes sous-populations cellulaires.</p></div><div><h3>Résultats</h3><p>Les cultures de PNE présentent des caractéristiques satisfaisantes en terme de pureté (><!--> <!-->90 %), absence d’activation des PNE (CD<sub>63</sub>-), ainsi qu’une viabilité jusqu’à 48<!--> <!-->h de culture (pas d’augmentation significative de la LDH). Lors des co-cultures en interface liquide-liquide, il a été observé une augmentation de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires (IL-6, CXCL8 et CCL2) par l’épithélium respiratoire BEAS-2B et A549 en présence de PNE. Une diminution de la TEER a également été observée en présence de PNE sur les cellules BEAS-2B. L’analyse par cytométrie des expectorations a permis d’identifier les différents types cellulaires tels que les macrophages, les monocytes, les éosinophiles, les neutrophiles, les lymphocytes T et les lymphocytes B.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>Cette étude de faisabilité décrit la mise au point de la culture des PNE et de la co-culture avec les lignées de cellules épithéliales respiratoires. Les modèles de coculture nous ont permis d’identifier un effet pro-inflammatoire des PNE au contact des lignées épithéliales bronchiques et alvéolaires. Par la suite ces expérimentations seront
{"title":"Détermination du rôle pro-fibrosant des éosinophiles humains sur l’épithélium respiratoire","authors":"N. Worbe , M. Brollo , P. Devillier , H. Salvator , A. Magnan , Q. Marquant , C. Tchérakian","doi":"10.1016/j.rmr.2024.01.077","DOIUrl":"https://doi.org/10.1016/j.rmr.2024.01.077","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><p>Les pneumopathies interstitielles diffuses (PID) sont des pathologies rares d’étiologies variées menant pour la plupart à la fibrose pulmonaire. Sur une cohorte de 220 atteints de PID fibrosantes suivis à l’hôpital Foch, 58 présentaient un taux de polynucléaires à éosinophiles (PNE) sanguin<!--> <!-->><!--> <!-->300/mm<sup>3</sup> considéré comme élevé <span>[1]</span>. Bien que le rôle des PNE dans le développement et/ou l’exacerbation des PID ait été fortement suggéré <span>[2]</span>, il n’a jamais été démontré. Nous émettons l’hypothèse que les PNE jouent un rôle dans la physiopathologie des PID. Afin de la vérifier, le projet INTREPID propose de caractériser les médiateurs de l’immunité de type 2 (cellulaires et solubles) chez 60 patients atteints de PID, en fonction de leur taux de PNE sanguin et de contrôler le caractère pro-fibrosant de leurs PNE in vitro. Les résultats présentés sont issus de la mise au point du modèle in vitro réalisés sur des volontaires sains.</p></div><div><h3>Méthodes</h3><p>Les PNE ont été isolés du sang de donneurs sains puis mis en culture, après vérification de leur pureté par cytométrie de flux CytoFlex SRT. Leur viabilité a été vérifiée par dosage de la lactate déshydrogénase (LDH) après 48<!--> <!-->h de culture. Les PNE ont été mis en coculture avec des lignées épithéliales bronchiques et alvéolaires (respectivement les cellules BEAS-2B et A549) en interface liquide-liquide et air-liquide. Les cytokines (IL-6, CXCL8, CCL5 et CCL2) ont été dosées par ELISA et une mesure de la résistance transépithéliale (TEER) a été effectuée. Les expectorations induites de sujets sains ont été analysées par cytométrie de flux et par coloration MGG afin d’étudier les différentes sous-populations cellulaires.</p></div><div><h3>Résultats</h3><p>Les cultures de PNE présentent des caractéristiques satisfaisantes en terme de pureté (><!--> <!-->90 %), absence d’activation des PNE (CD<sub>63</sub>-), ainsi qu’une viabilité jusqu’à 48<!--> <!-->h de culture (pas d’augmentation significative de la LDH). Lors des co-cultures en interface liquide-liquide, il a été observé une augmentation de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires (IL-6, CXCL8 et CCL2) par l’épithélium respiratoire BEAS-2B et A549 en présence de PNE. Une diminution de la TEER a également été observée en présence de PNE sur les cellules BEAS-2B. L’analyse par cytométrie des expectorations a permis d’identifier les différents types cellulaires tels que les macrophages, les monocytes, les éosinophiles, les neutrophiles, les lymphocytes T et les lymphocytes B.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>Cette étude de faisabilité décrit la mise au point de la culture des PNE et de la co-culture avec les lignées de cellules épithéliales respiratoires. Les modèles de coculture nous ont permis d’identifier un effet pro-inflammatoire des PNE au contact des lignées épithéliales bronchiques et alvéolaires. Par la suite ces expérimentations seront ","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"41 3","pages":"Page 220"},"PeriodicalIF":0.6,"publicationDate":"2024-03-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"140159931","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2024-03-01DOI: 10.1016/j.rmr.2024.01.080
S. Carignon , D. De Moura Rodrigues , D. Gosset , E. Culerier , S. Huot-Marchand , F. Savigny , E. Kaya , V. Quesniaux , A. Gombault , I. Couillin , B. Ryffel , M. Le Bert , N. Riteau
Introduction
The pathogenesis of chronic lung diseases is multifaceted with a major role of recurrent micro-injuries of the epithelium. While several reports clearly indicated a prominent role for surfactant-producing alveolar epithelial type 2 (AT2) cells, the contribution of gas exchange permissive alveolar epithelial type 1 (AT1) cells has not been addressed yet. Here, we investigated whether repeated injury of AT1 cells leads to inflammation and interstitial fibrosis.
Methods
We chose an inducible model of AT1 cell depletion following local diphtheria toxin (DT) administration using an iDTRfl/fl X Aquaporin 5CRE (Aqp5CRE) transgenic mouse strain.
Results
We investigated repeated doses and intervals of DT to induce cell death of AT1 cells causing inflammation and interstitial fibrosis. We found that repeated DT administrations of 1 ng DT in iDTRfl/fl X Aquaporin 5CRE mice causes AT1 cell death leading to inflammation, increased tissue repair markers and interstitial pulmonary fibrosis.
Conclusion
Together, we demonstrate that depletion of AT1 cells using repeated injury represents a novel approach to investigate chronic lung inflammatory diseases and to identify new therapeutic targets.
{"title":"Lung inflammation and interstitial fibrosis by targeted alveolar epithelial type I cell death","authors":"S. Carignon , D. De Moura Rodrigues , D. Gosset , E. Culerier , S. Huot-Marchand , F. Savigny , E. Kaya , V. Quesniaux , A. Gombault , I. Couillin , B. Ryffel , M. Le Bert , N. Riteau","doi":"10.1016/j.rmr.2024.01.080","DOIUrl":"https://doi.org/10.1016/j.rmr.2024.01.080","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><p>The pathogenesis of chronic lung diseases is multifaceted with a major role of recurrent micro-injuries of the epithelium. While several reports clearly indicated a prominent role for surfactant-producing alveolar epithelial type 2 (AT2) cells, the contribution of gas exchange permissive alveolar epithelial type 1 (AT1) cells has not been addressed yet. Here, we investigated whether repeated injury of AT1 cells leads to inflammation and interstitial fibrosis.</p></div><div><h3>Methods</h3><p>We chose an inducible model of AT1 cell depletion following local diphtheria toxin (DT) administration using an iDTRfl/fl X Aquaporin 5CRE (Aqp5CRE) transgenic mouse strain.</p></div><div><h3>Results</h3><p>We investigated repeated doses and intervals of DT to induce cell death of AT1 cells causing inflammation and interstitial fibrosis. We found that repeated DT administrations of 1<!--> <!-->ng DT in iDTRfl/fl X Aquaporin 5CRE mice causes AT1 cell death leading to inflammation, increased tissue repair markers and interstitial pulmonary fibrosis.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>Together, we demonstrate that depletion of AT1 cells using repeated injury represents a novel approach to investigate chronic lung inflammatory diseases and to identify new therapeutic targets.</p></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"41 3","pages":"Page 221"},"PeriodicalIF":0.6,"publicationDate":"2024-03-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"140159934","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2024-03-01DOI: 10.1016/j.rmr.2024.01.021
A. Bodin , A. Lan , P. Bellaud , V. Lagente , T. Victoni
Introduction
New interest emerges on organoids for studying lung diseases, mainly chronic obstructive pulmonary disease (COPD). COPD is lung disease a characterize by chronic inflammation and excessive remodeling in small airway. The complexity of this disease is now widely recognized, cellular-based research remains highly challenging because of the lack of suitable experimental models that recapitulate between interaction of cells. Alveolar organoids could enable us to assess the involvement of several type cells in response to damage from cigarette smoke, one major risk factor of COPD. The aim of this study is to characterize an in vitro 3D alveolar model from mouse lungs.
Methods
We used progenitor cells isolated by filtration from pieces of mouse lung and cultivated in Matrigel. We cultivated first part of lung organoids in conditioned expansion medium for ten days. After another part of organoids were differentiated in conditioned differentiation alveolar medium during ten days. Then, we assessed several markers of alveolar cells differentiated, fibroblast markers, or stem cell markers gene expression by RT-qPCR in the two conditions.
Results
The markers used are as follow: (1) aquaporin 5 (Aqp5), homeodomain-only protein homeobox (Hopx), advanced glycation endproduct-specific receptor (Ager) and podoplanin (Pdpn) for alveolar type 1 (AT1); (2) surfactant protein b (Sfptb), surfactant protein c (Sfptc) for alveolar type 2 (AT2); (3) platelet-derived growth factor alpha (Pdgfrα) for fibroblast; (4) secretoglobin family 1A member 1 (Scgb1a1) and surfactant protein c (Sfptc) for stem cells; (5) epithelial cell adhesion molecule (Epcam) as markers of differentiated airway and alveolar epithelium. Epcam, Sfptb and Aqp5 gene expression was increased in both conditions compared to the single cell group. On the other hand, aquaporin 5 expression was greater in the differentiated medium condition compared with organoids exposed to undifferentiated medium. We also observed an increase in the expression of the Sfptc marker in the differentiated condition. Futhermore, fibroblast and stem cells appear to be poorly represented in organoids, indeed the following markers platelet-derived growth factor alpha (Pdgfrα) and secretoglobin family 1A member 1 (Scgb1a1) are weakly expressed.
Conclusion
Our results show alveolar organoids derived mouse lung present both AT1 and AT2 cells. So, these organoids can used as multicellular experimental models for studying cigarette smoke damage.
{"title":"Characterization an in vitro 3D alveolar model in COPD","authors":"A. Bodin , A. Lan , P. Bellaud , V. Lagente , T. Victoni","doi":"10.1016/j.rmr.2024.01.021","DOIUrl":"https://doi.org/10.1016/j.rmr.2024.01.021","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><p>New interest emerges on organoids for studying lung diseases, mainly chronic obstructive pulmonary disease (COPD). COPD is lung disease a characterize by chronic inflammation and excessive remodeling in small airway. The complexity of this disease is now widely recognized, cellular-based research remains highly challenging because of the lack of suitable experimental models that recapitulate between interaction of cells. Alveolar organoids could enable us to assess the involvement of several type cells in response to damage from cigarette smoke, one major risk factor of COPD. The aim of this study is to characterize an in vitro 3D alveolar model from mouse lungs.</p></div><div><h3>Methods</h3><p>We used progenitor cells isolated by filtration from pieces of mouse lung and cultivated in Matrigel. We cultivated first part of lung organoids in conditioned expansion medium for ten days. After another part of organoids were differentiated in conditioned differentiation alveolar medium during ten days. Then, we assessed several markers of alveolar cells differentiated, fibroblast markers, or stem cell markers gene expression by RT-qPCR in the two conditions.</p></div><div><h3>Results</h3><p>The markers used are as follow: (1) aquaporin 5 (Aqp5), homeodomain-only protein homeobox (Hopx), advanced glycation endproduct-specific receptor (Ager) and podoplanin (Pdpn) for alveolar type 1 (AT1); (2) surfactant protein b (Sfptb), surfactant protein c (Sfptc) for alveolar type 2 (AT2); (3) platelet-derived growth factor alpha (Pdgfrα) for fibroblast; (4) secretoglobin family 1A member 1 (Scgb1a1) and surfactant protein c (Sfptc) for stem cells; (5) epithelial cell adhesion molecule (Epcam) as markers of differentiated airway and alveolar epithelium. Epcam, Sfptb and Aqp5 gene expression was increased in both conditions compared to the single cell group. On the other hand, aquaporin 5 expression was greater in the differentiated medium condition compared with organoids exposed to undifferentiated medium. We also observed an increase in the expression of the Sfptc marker in the differentiated condition. Futhermore, fibroblast and stem cells appear to be poorly represented in organoids, indeed the following markers platelet-derived growth factor alpha (Pdgfrα) and secretoglobin family 1A member 1 (Scgb1a1) are weakly expressed.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>Our results show alveolar organoids derived mouse lung present both AT1 and AT2 cells. So, these organoids can used as multicellular experimental models for studying cigarette smoke damage.</p></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"41 3","pages":"Page 191"},"PeriodicalIF":0.6,"publicationDate":"2024-03-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"140160094","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2024-03-01DOI: 10.1016/j.rmr.2024.01.032
M. Ferreira , M. Pronost , L. Guillot , D. Sizaret , A. Gey , E. Tartour , T. Secher , N. Heuzé-Vourc’h
<div><h3>Introduction</h3><p>The management of metastatic non-small cell lung cancer (NSCLC) has been revolutionized by immune checkpoint inhibitors (ICI). However, it would be valuable to refine ICI treatment with predictive combined biomarkers models. The tumor microenvironment is profoundly affecting ICI response in NSCLC. Tissue-resident memory T cells (TRM) are a non-circulating lymphocyte population encountered in peripheral tissues with both memory and effector functions. TRM infiltration in lung tumor is correlated with favourable ICI response in NSCLC. But it is not possible to perform iterative lung biopsies to monitor TRM during treatment. The objectives of this study were to evaluate the feasibility of a longitudinal collection of sputum in NSCLC patients and to evaluate TRM cells in comparison with lung biopsies.</p></div><div><h3>Methods</h3><p>This prospective and exploratory study included 9 patients with a NSCLC treated in first line with pembrolizumab. Before the first ICI infusion and every treatment day until 12-month follow-up, patients received a 15-minute aerosol of isotonic saline solution during which they expectorate. To recover sputum cells, samples were clarified from mucus, stirred, and filtered. TRM cells were quantified by flow cytometry, as CD<sub>45</sub> +CD<sub>3</sub> +CD<sub>8</sub> +CD<sub>49</sub> +CD<sub>69</sub> +CD<sub>103</sub>+ or CD<sub>103</sub>− cells. Spectral multiplex in situ immunofluorescence was used to quantify TRM cells in lung tissue biopsies collected before ICI treatment.</p></div><div><h3>Results</h3><p>Between May 2021 and September 2022. Nine patients were included: median age was 62 (42–83) years and all patients had smoking history. All patients were able to provide a sputum at each visit and the median follow-up duration was 6.9<!--> <!-->months. We were able to identify longitudinally TRM cells in sputum: 80 adequate sputum samples (97.6%) were analyzed by flow cytometry. In order to evaluate the representativeness of TRM cells in sputum, we compared TRM cell proportion determined in lung biopsies by immunofluorescence (method 1) and in the first sputum, by flow cytometry (method 2). The Bland-Altman analysis showed that differences between the 2 methods fitted in the 95% of agreement and bias were close to zero. Thus, there was an agreement between the measurement methods. Moreover, calculation of Pearson coefficient showed a <em>P</em>-value<!--> <!--><<!--> <!-->0.05 for both CD<sub>103</sub>+ and CD<sub>103</sub>− cells, suggesting that the correlation between the two methods was significant.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>Our results indicate that sputum offer a simple and non-invasive indirect estimate of the immune cell infiltration in the pulmonary tissue and allow analysis of TRM cell dynamics during ICI treatment in NSCLC. Sputum collection might help understanding evolution of local immune response during NSCLC and ICI treatment, extending immunological studies to
{"title":"Sputum as a new reflective tool of local immune response in lung cancer","authors":"M. Ferreira , M. Pronost , L. Guillot , D. Sizaret , A. Gey , E. Tartour , T. Secher , N. Heuzé-Vourc’h","doi":"10.1016/j.rmr.2024.01.032","DOIUrl":"https://doi.org/10.1016/j.rmr.2024.01.032","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><p>The management of metastatic non-small cell lung cancer (NSCLC) has been revolutionized by immune checkpoint inhibitors (ICI). However, it would be valuable to refine ICI treatment with predictive combined biomarkers models. The tumor microenvironment is profoundly affecting ICI response in NSCLC. Tissue-resident memory T cells (TRM) are a non-circulating lymphocyte population encountered in peripheral tissues with both memory and effector functions. TRM infiltration in lung tumor is correlated with favourable ICI response in NSCLC. But it is not possible to perform iterative lung biopsies to monitor TRM during treatment. The objectives of this study were to evaluate the feasibility of a longitudinal collection of sputum in NSCLC patients and to evaluate TRM cells in comparison with lung biopsies.</p></div><div><h3>Methods</h3><p>This prospective and exploratory study included 9 patients with a NSCLC treated in first line with pembrolizumab. Before the first ICI infusion and every treatment day until 12-month follow-up, patients received a 15-minute aerosol of isotonic saline solution during which they expectorate. To recover sputum cells, samples were clarified from mucus, stirred, and filtered. TRM cells were quantified by flow cytometry, as CD<sub>45</sub> +CD<sub>3</sub> +CD<sub>8</sub> +CD<sub>49</sub> +CD<sub>69</sub> +CD<sub>103</sub>+ or CD<sub>103</sub>− cells. Spectral multiplex in situ immunofluorescence was used to quantify TRM cells in lung tissue biopsies collected before ICI treatment.</p></div><div><h3>Results</h3><p>Between May 2021 and September 2022. Nine patients were included: median age was 62 (42–83) years and all patients had smoking history. All patients were able to provide a sputum at each visit and the median follow-up duration was 6.9<!--> <!-->months. We were able to identify longitudinally TRM cells in sputum: 80 adequate sputum samples (97.6%) were analyzed by flow cytometry. In order to evaluate the representativeness of TRM cells in sputum, we compared TRM cell proportion determined in lung biopsies by immunofluorescence (method 1) and in the first sputum, by flow cytometry (method 2). The Bland-Altman analysis showed that differences between the 2 methods fitted in the 95% of agreement and bias were close to zero. Thus, there was an agreement between the measurement methods. Moreover, calculation of Pearson coefficient showed a <em>P</em>-value<!--> <!--><<!--> <!-->0.05 for both CD<sub>103</sub>+ and CD<sub>103</sub>− cells, suggesting that the correlation between the two methods was significant.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>Our results indicate that sputum offer a simple and non-invasive indirect estimate of the immune cell infiltration in the pulmonary tissue and allow analysis of TRM cell dynamics during ICI treatment in NSCLC. Sputum collection might help understanding evolution of local immune response during NSCLC and ICI treatment, extending immunological studies to","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"41 3","pages":"Pages 196-197"},"PeriodicalIF":0.6,"publicationDate":"2024-03-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"140160412","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2024-03-01DOI: 10.1016/j.rmr.2024.01.035
J. Jacquet , E. Marcos , L. Lipskaia , V. Gros , E. Born , N. Vienney , A. Houssaini , C. Jourdan Le Saux , S. Adnot , L. Boyer
Introduction
Le vieillissement vasculaire entraîne une raréfaction des microvaisseaux. Le mécanisme proposé est une insuffisance de signalisation du facteur de croissance endothélial vasculaire (VEGF) dont l’action est perturbée par une production accrue d’une forme soluble de son récepteur VEGFR1 (sVEGFR1) qui l’empêche de se fixer à son récepteur actif, le VEGFR1 exprimé par les CEs. Les CEs des microvaisseaux pulmonaires (PCEs) sont nécessaires à la fonction des poumons et nécessitent le signal de survie du VEGF, en l’absence duquel elles peuvent rentrer en sénescence, caractérisée par un arrêt de la division cellulaire et la libération de facteurs nocifs pour les poumons. Nous avons montré une accumulation de PCEs sénescentes au cours de l’hypertension (HTP) et de l’emphysème pulmonaires.
Méthode
Évaluer l’insuffisance de signalisation du VEGF dans la sénescence des PCEs liée à deux pathologies, l’hypertension (HTP) et l’emphysème pulmonaires.
Résultats
Les poumons des souris âgées par rapport aux jeunes souris ont une densité capillaire plus faible se manifestant par une diminution du nombre de PCEs identifiées en immunohistochimie par marquage de l’ICAM1 ou de l’isolectine B4. Le traitement des souris par l’inhibiteur du récepteur du VEGF Sugen amplifie ces effets et augmente le nombre de PCEs sénescentes marquées p16, en diminuant le réseau capillaire pulmonaire, en détériorant l’hémodynamique pulmonaire et en induisant de l’emphysème. L’expression pulmonaire de sVEGFR1 chez les souris développant une HTP hypoxique est augmentée et aggravée par le Sugen, de même que l’expression pulmonaire de deux facteurs modulant l’épissage alternatif du VEGFR1 et la formation de sVEGFR1, le domaine Jumonji contenant la protéine 6 (Jmjd6) et le TNFSF15. Nous montrons in vitro qu’un traitement par le sVEGFR1 de PCEs en culture issues de patients (étude Costemcells) entraîne une augmentation de la sénescence cellulaire. Pour contrer la forte susceptibilité des PCEs à la sénescence dans l’HTP et l’emphysème, nous avons généré un nouveau modèle murin qui surexprime le VEGF selon un système Tet On inductible et spécifique au tissu. Ces souris sont en cours d’étude, croisées avec des souris exprimant la Cre-recombinase dans le foie (souris Alb-Cre), afin d’assurer un apport contrôlé de VEGF du foie vers les poumons.
Conclusion
L’augmentation du sVEGFR1 circulant au cours du vieillissement et des pathologies pulmonaires tels que l’HTP et l’emphysème pourrait être responsable de la sénescence des PCEs. Contrecarrer l’insuffisance de signalisation du VEGF devrait permettre de réduire la sévérité de ces pathologies.
{"title":"Rôle de la dysfonction du facteur d’angiogenèse VEGF dans la sénescence des cellules endothéliales pulmonaires","authors":"J. Jacquet , E. Marcos , L. Lipskaia , V. Gros , E. Born , N. Vienney , A. Houssaini , C. Jourdan Le Saux , S. Adnot , L. Boyer","doi":"10.1016/j.rmr.2024.01.035","DOIUrl":"https://doi.org/10.1016/j.rmr.2024.01.035","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><p>Le vieillissement vasculaire entraîne une raréfaction des microvaisseaux. Le mécanisme proposé est une insuffisance de signalisation du facteur de croissance endothélial vasculaire (VEGF) dont l’action est perturbée par une production accrue d’une forme soluble de son récepteur VEGFR1 (sVEGFR1) qui l’empêche de se fixer à son récepteur actif, le VEGFR1 exprimé par les CEs. Les CEs des microvaisseaux pulmonaires (PCEs) sont nécessaires à la fonction des poumons et nécessitent le signal de survie du VEGF, en l’absence duquel elles peuvent rentrer en sénescence, caractérisée par un arrêt de la division cellulaire et la libération de facteurs nocifs pour les poumons. Nous avons montré une accumulation de PCEs sénescentes au cours de l’hypertension (HTP) et de l’emphysème pulmonaires.</p></div><div><h3>Méthode</h3><p>Évaluer l’insuffisance de signalisation du VEGF dans la sénescence des PCEs liée à deux pathologies, l’hypertension (HTP) et l’emphysème pulmonaires.</p></div><div><h3>Résultats</h3><p>Les poumons des souris âgées par rapport aux jeunes souris ont une densité capillaire plus faible se manifestant par une diminution du nombre de PCEs identifiées en immunohistochimie par marquage de l’ICAM1 ou de l’isolectine B4. Le traitement des souris par l’inhibiteur du récepteur du VEGF Sugen amplifie ces effets et augmente le nombre de PCEs sénescentes marquées p16, en diminuant le réseau capillaire pulmonaire, en détériorant l’hémodynamique pulmonaire et en induisant de l’emphysème. L’expression pulmonaire de sVEGFR1 chez les souris développant une HTP hypoxique est augmentée et aggravée par le Sugen, de même que l’expression pulmonaire de deux facteurs modulant l’épissage alternatif du VEGFR1 et la formation de sVEGFR1, le domaine Jumonji contenant la protéine 6 (Jmjd6) et le TNFSF15. Nous montrons in vitro qu’un traitement par le sVEGFR1 de PCEs en culture issues de patients (étude Costemcells) entraîne une augmentation de la sénescence cellulaire. Pour contrer la forte susceptibilité des PCEs à la sénescence dans l’HTP et l’emphysème, nous avons généré un nouveau modèle murin qui surexprime le VEGF selon un système Tet On inductible et spécifique au tissu. Ces souris sont en cours d’étude, croisées avec des souris exprimant la Cre-recombinase dans le foie (souris Alb-Cre), afin d’assurer un apport contrôlé de VEGF du foie vers les poumons.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>L’augmentation du sVEGFR1 circulant au cours du vieillissement et des pathologies pulmonaires tels que l’HTP et l’emphysème pourrait être responsable de la sénescence des PCEs. Contrecarrer l’insuffisance de signalisation du VEGF devrait permettre de réduire la sévérité de ces pathologies.</p></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"41 3","pages":"Page 198"},"PeriodicalIF":0.6,"publicationDate":"2024-03-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"140160415","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2024-03-01DOI: 10.1016/j.rmr.2024.01.069
T. Iskounen , R. Hindre , F. Jeny , O. Frenoy , M.N. Triba , J.F. Bernaudin , D. Valeyre , M. Kambouchner , H. Nunes , C. Planès , V. Besnard
<div><h3>Introduction</h3><p>La sarcoïdose est une maladie systémique d’étiologie inconnue caractérisée par la formation de granulomes immuns, principalement dans le poumon. L’analyse génomique du sang périphérique a montré que la voie de signalisation JAK/STAT est significativement représentée dans la sarcoïdose. Notre objectif était de déterminer l’expression des membres de la voie JAK/STAT au cours du développement des granulomes chez des patients présentant différents stades de sévérité de la pathologie.</p></div><div><h3>Méthodes</h3><p>Une étude rétrospective a été réalisée sur des biopsies de patients diagnostiqués pour la sarcoïdose. Les formes activées des protéines JAKs et STATs ont été étudiées par immunodétection (histochimie, fluorescence, Hyperion) sur des biopies : poumon (alvéolaire) (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->10), peau (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->13), ganglions lymphatiques (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->12), foie (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->9) et glandes salivaires (n<!--> <!-->=<!--> <!-->8). Des tests statistiques ont été réalisés pour comparer l’activation des protéines JAKs et STATs dans les granulomes de différents organes, et étudier leurs relations avec le stade évolutif du granulome (naissant/floride/« naked »/fibreux).</p></div><div><h3>Résultats</h3><p>La cohorte regroupait deux profils d’évolution variable : sarcoïdose résolue (50 %) ou persistante (50 %). Seule pJAK2 a été détectée, principalement dans les lymphocytes CD3+ et peu dans la lignée myéloïde. Dans les lymphocytes, seule une localisation nucléaire pJAK2 a été observée, suggérant l’activation d’une voie non canonique de JAK2. La localisation nucléaire de pJAK2 a été confirmée par colocalisation avec DAPI/histone H3. pJAK2 est principalement colocalisée avec l’histone H3K4me, associée à une activité transcriptionnelle intense. Seules les formes actives de pSTAT1, pSTAT3 et pSTAT5 ont été détectées dans les granulomes, principalement dans les cellules de la lignée myéloïde. Les formes actives pJAK2 et pSTAT1/pSTAT3/pSTAT5 ont des niveaux d’expression variables dans les biopsies analysées. PJAK2 est exprimée quasi-systématiquement dans toutes les biopsies, alors que pSTAT1, pSTAT3 et pSTAT5 sont exprimés au moins dans la moitié des biopsies. L’expression des 4 protéines est la plus importante dans les biopsies pulmonaires (AUC<!--> <!-->=<!--> <!-->0,83) et cutanées (AUC<!--> <!-->=<!--> <!-->0,89) et est en moyenne associée à une persistance de la maladie (COS<!--> <!-->≥<!--> <!-->5, <em>p</em> <!--><<!--> <!-->0,001). Deux signatures ont été identifiées dans les lymphocytes/lignée myéloïde : pJAK2/pSTAT1-pSTAT5 (poumon ; (AUC<!--> <!-->=<!--> <!-->0,84)) et pJAK2/pSTAT3-pSTAT5 (peau ; [AUC<!--> <!-->=<!--> <!-->0,80]). L’analyse des stades évolutifs du granulome a montré une corrélation positive significative entre l’expression des formes activées de pSTAT1(<em>p</em> <!--><<!--> <!-->0,05), pSTAT3 (<em>p</em> <!--><<!--> <!-->0,05), pSTAT5 (<em>
{"title":"Implication des protéines JAK2 et STAT-1/3/5 dans la sarcoïdose","authors":"T. Iskounen , R. Hindre , F. Jeny , O. Frenoy , M.N. Triba , J.F. Bernaudin , D. Valeyre , M. Kambouchner , H. Nunes , C. Planès , V. Besnard","doi":"10.1016/j.rmr.2024.01.069","DOIUrl":"https://doi.org/10.1016/j.rmr.2024.01.069","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><p>La sarcoïdose est une maladie systémique d’étiologie inconnue caractérisée par la formation de granulomes immuns, principalement dans le poumon. L’analyse génomique du sang périphérique a montré que la voie de signalisation JAK/STAT est significativement représentée dans la sarcoïdose. Notre objectif était de déterminer l’expression des membres de la voie JAK/STAT au cours du développement des granulomes chez des patients présentant différents stades de sévérité de la pathologie.</p></div><div><h3>Méthodes</h3><p>Une étude rétrospective a été réalisée sur des biopsies de patients diagnostiqués pour la sarcoïdose. Les formes activées des protéines JAKs et STATs ont été étudiées par immunodétection (histochimie, fluorescence, Hyperion) sur des biopies : poumon (alvéolaire) (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->10), peau (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->13), ganglions lymphatiques (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->12), foie (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->9) et glandes salivaires (n<!--> <!-->=<!--> <!-->8). Des tests statistiques ont été réalisés pour comparer l’activation des protéines JAKs et STATs dans les granulomes de différents organes, et étudier leurs relations avec le stade évolutif du granulome (naissant/floride/« naked »/fibreux).</p></div><div><h3>Résultats</h3><p>La cohorte regroupait deux profils d’évolution variable : sarcoïdose résolue (50 %) ou persistante (50 %). Seule pJAK2 a été détectée, principalement dans les lymphocytes CD3+ et peu dans la lignée myéloïde. Dans les lymphocytes, seule une localisation nucléaire pJAK2 a été observée, suggérant l’activation d’une voie non canonique de JAK2. La localisation nucléaire de pJAK2 a été confirmée par colocalisation avec DAPI/histone H3. pJAK2 est principalement colocalisée avec l’histone H3K4me, associée à une activité transcriptionnelle intense. Seules les formes actives de pSTAT1, pSTAT3 et pSTAT5 ont été détectées dans les granulomes, principalement dans les cellules de la lignée myéloïde. Les formes actives pJAK2 et pSTAT1/pSTAT3/pSTAT5 ont des niveaux d’expression variables dans les biopsies analysées. PJAK2 est exprimée quasi-systématiquement dans toutes les biopsies, alors que pSTAT1, pSTAT3 et pSTAT5 sont exprimés au moins dans la moitié des biopsies. L’expression des 4 protéines est la plus importante dans les biopsies pulmonaires (AUC<!--> <!-->=<!--> <!-->0,83) et cutanées (AUC<!--> <!-->=<!--> <!-->0,89) et est en moyenne associée à une persistance de la maladie (COS<!--> <!-->≥<!--> <!-->5, <em>p</em> <!--><<!--> <!-->0,001). Deux signatures ont été identifiées dans les lymphocytes/lignée myéloïde : pJAK2/pSTAT1-pSTAT5 (poumon ; (AUC<!--> <!-->=<!--> <!-->0,84)) et pJAK2/pSTAT3-pSTAT5 (peau ; [AUC<!--> <!-->=<!--> <!-->0,80]). L’analyse des stades évolutifs du granulome a montré une corrélation positive significative entre l’expression des formes activées de pSTAT1(<em>p</em> <!--><<!--> <!-->0,05), pSTAT3 (<em>p</em> <!--><<!--> <!-->0,05), pSTAT5 (<em>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"41 3","pages":"Pages 215-216"},"PeriodicalIF":0.6,"publicationDate":"2024-03-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"140160419","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2024-03-01DOI: 10.1016/j.rmr.2024.01.071
A. Dias , H. Sikner , A.G. Garnier , J. Tanguy , A. Bouchard , M. Moreau , M. Claron , O. Burgy , F. Goirand , P. Bonniaud , B. Collin , P.S. Bellaye
<div><h3>Introduction</h3><p>La fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) est une maladie évolutive caractérisée par une production et un dépôt excessif de matrice extracellulaire (MEC) entraînant une insuffisance respiratoire chez les patients. Sous l’influence de cytokines pro-fibrotiques telles que le TGF-β1, les cellules pulmonaires vont acquérir un phénotype myofibroblastique caractérisé par l’expression de la <em>Fibroblast Activation Protein</em> (FAP) et une surproduction de MEC. Les options de traitement de la FPI sont limitées et ne peuvent que retarder la progression de la maladie sans l’arrêter. La Gp96 est une protéine chaperonne du réticulum endoplasmique surexprimée au cours de la fibrose et favorisant l’expression membranaire de nombreux récepteurs impliqués dans la fibrogenèse. L’inhibition de Gp96 apparait comme une stratégie thérapeutique intéressante dans la FPI et nous émettons l’hypothèse que l’imagerie <em>in vivo</em> des myofibroblastes via une sonde ciblant FAP pourrait permettre de suivre l’efficacité de ce type de traitement.</p></div><div><h3>Méthodes</h3><p>Des souris C57BL/6 (mâles, 8 semaines) ont reçu une administration unique intratrachéale de bléomycine (BLM, 1,5<!--> <!-->mg/kg) ou de NaCl (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->14) comme contrôle, puis ont été traitées ou non par un inhibiteur de Gp96 (PU-WS13, 12,5<!--> <!-->mg/kg, gavage quotidien, <em>n</em> <!-->=<!--> <!-->17) ou du NaCl (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->16, gavage quotidien) de J<sub>8</sub> à J<sub>22</sub>. La fibrose a été suivie longitudinalement par imagerie CT à J<sub>8</sub>, J<sub>15</sub>et J<sub>22</sub>. À J<sub>22</sub>, les poumons et les liquides de lavage bronchoalvéolaires (BAL) ont été récupérés pour quantification du collagène (Rouge Sirius, Sircol et Ashcroft score), immunomarquage de FAP (IHC) et dosage du TGF-β1 (ELISA). <em>In vitro</em>, des cellules A549 stimulées au TGF-β1 (2<!--> <!-->ng/mL, 24<!--> <!-->h) ont été traitées ou non par du PUWS13 (25/50<!--> <!-->μM, 24<!--> <!-->h) pour étudier l’expression de la protéine FAP (WB) et les interactions protéine-protéine entre Gp96 et FAP (Proximity ligation assay, PLA). Une sonde d’imagerie spécifique de FAP a été mise au point à partir d’un fragment d’anticorps anti-FAP couplé à un agent chélateur (DOTAGA) pour le radiomarquage à l’indium-111 pour l’imagerie par tomographie par émission monophotonique (SPECT). La sonde <sup>111</sup>In-DOTAGA-Fab-FAP a été injectée par voie intraveineuse à des souris C57BL/6 (100<!--> <!-->μL, 10MBq, 25<!--> <!-->μg). Les souris ont subi des imageries SPECT à 1<!--> <!-->h, 4<!--> <!-->h et 24<!--> <!-->h post-injection à J<sub>7</sub>et J<sub>15</sub>. Des régions d’intérêt 3D ont été tracées sur le volume pulmonaire total (Vivoquant) afin de quantifier la fibrose (image CT) et l’accumulation de la sonde au niveau pulmonaire (SPECT) dans les différents groupes de souris (1/NaCl, 2/BLM et 3/BLM<!--> <!-->+<!--> <!-->PU-WS13).</p></div><div><h3>Résult
{"title":"Inhibition de Gp96 comme stratégie anti-fibrotique dans la fibrose pulmonaire idiopathique et son suivi par l’imagerie SPECT in vivo de la Fibroblast Activation Protein","authors":"A. Dias , H. Sikner , A.G. Garnier , J. Tanguy , A. Bouchard , M. Moreau , M. Claron , O. Burgy , F. Goirand , P. Bonniaud , B. Collin , P.S. Bellaye","doi":"10.1016/j.rmr.2024.01.071","DOIUrl":"https://doi.org/10.1016/j.rmr.2024.01.071","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><p>La fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) est une maladie évolutive caractérisée par une production et un dépôt excessif de matrice extracellulaire (MEC) entraînant une insuffisance respiratoire chez les patients. Sous l’influence de cytokines pro-fibrotiques telles que le TGF-β1, les cellules pulmonaires vont acquérir un phénotype myofibroblastique caractérisé par l’expression de la <em>Fibroblast Activation Protein</em> (FAP) et une surproduction de MEC. Les options de traitement de la FPI sont limitées et ne peuvent que retarder la progression de la maladie sans l’arrêter. La Gp96 est une protéine chaperonne du réticulum endoplasmique surexprimée au cours de la fibrose et favorisant l’expression membranaire de nombreux récepteurs impliqués dans la fibrogenèse. L’inhibition de Gp96 apparait comme une stratégie thérapeutique intéressante dans la FPI et nous émettons l’hypothèse que l’imagerie <em>in vivo</em> des myofibroblastes via une sonde ciblant FAP pourrait permettre de suivre l’efficacité de ce type de traitement.</p></div><div><h3>Méthodes</h3><p>Des souris C57BL/6 (mâles, 8 semaines) ont reçu une administration unique intratrachéale de bléomycine (BLM, 1,5<!--> <!-->mg/kg) ou de NaCl (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->14) comme contrôle, puis ont été traitées ou non par un inhibiteur de Gp96 (PU-WS13, 12,5<!--> <!-->mg/kg, gavage quotidien, <em>n</em> <!-->=<!--> <!-->17) ou du NaCl (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->16, gavage quotidien) de J<sub>8</sub> à J<sub>22</sub>. La fibrose a été suivie longitudinalement par imagerie CT à J<sub>8</sub>, J<sub>15</sub>et J<sub>22</sub>. À J<sub>22</sub>, les poumons et les liquides de lavage bronchoalvéolaires (BAL) ont été récupérés pour quantification du collagène (Rouge Sirius, Sircol et Ashcroft score), immunomarquage de FAP (IHC) et dosage du TGF-β1 (ELISA). <em>In vitro</em>, des cellules A549 stimulées au TGF-β1 (2<!--> <!-->ng/mL, 24<!--> <!-->h) ont été traitées ou non par du PUWS13 (25/50<!--> <!-->μM, 24<!--> <!-->h) pour étudier l’expression de la protéine FAP (WB) et les interactions protéine-protéine entre Gp96 et FAP (Proximity ligation assay, PLA). Une sonde d’imagerie spécifique de FAP a été mise au point à partir d’un fragment d’anticorps anti-FAP couplé à un agent chélateur (DOTAGA) pour le radiomarquage à l’indium-111 pour l’imagerie par tomographie par émission monophotonique (SPECT). La sonde <sup>111</sup>In-DOTAGA-Fab-FAP a été injectée par voie intraveineuse à des souris C57BL/6 (100<!--> <!-->μL, 10MBq, 25<!--> <!-->μg). Les souris ont subi des imageries SPECT à 1<!--> <!-->h, 4<!--> <!-->h et 24<!--> <!-->h post-injection à J<sub>7</sub>et J<sub>15</sub>. Des régions d’intérêt 3D ont été tracées sur le volume pulmonaire total (Vivoquant) afin de quantifier la fibrose (image CT) et l’accumulation de la sonde au niveau pulmonaire (SPECT) dans les différents groupes de souris (1/NaCl, 2/BLM et 3/BLM<!--> <!-->+<!--> <!-->PU-WS13).</p></div><div><h3>Résult","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"41 3","pages":"Pages 216-217"},"PeriodicalIF":0.6,"publicationDate":"2024-03-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"140160421","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2024-03-01DOI: 10.1016/j.rmr.2024.01.054
A. Bodin , C. Slek , M. Magnin , L. Commin , A. Corlu , V. Lagente , C. Aninat , J.M. Bonnet , B. Allaouchiche , V. Louzier , T. Victoni
<div><h3>Introduction</h3><p>Sepsis is defined as life-threatening organ dysfunction caused by a dysregulated host response to infection. The complex pathophysiology of sepsis is associated with pro- and anti-inflammatory response, a pro-coagulant state, endothelial dysfunction and tissue hypoxia. These mechanisms lead to progressive multi organ failure. Although this is a systemic process, the pathophysiological of sepsis differs from organ to organ, and from organ to peripheral blood. Our hypothesis to explain this compartmentalization of responses is a distinct population of resident tissue macrophages, as well as a distinct migration of monocytes in target organ. Indeed, the macrophages and monocytes can start the clinical syndrome of sepsis via transcription of genes involved in inflammation. Moreover, macrophages can induce endothelial injury by release reactive oxygen species. Also hypoxia decreases expression of M1 polarization markers and increases the M2 marker. Identification of biomarkers related to specific organs (beyond the blood) will improve the understanding specific organ failure. In this way, the aim of this study was compared to the systemic inflammatory response with the lung and the liver, two organs most affected during sepsis as well as understanding the role of macrophages in this compartmentalization. For this, a murine polymicrobial sepsis model induced by caecal ligation and puncture (CLP) was used.</p></div><div><h3>Methods</h3><p>Moderate sepsis was induced by the CLP in C57BL/6 male mice (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->63), divided into 4 groups: Basal, Sham 1 day and 5 days, CLP 1 days and 5 days. Then, we analyzed histological changes, cytokine profile (by ELISA and PCR), oxidative imbalance (expression of SOD, CAT and iNOS) and polarization markers (CD<sub>86</sub>and CD<sub>206</sub>) by immunohistochemistry.</p></div><div><h3>Results</h3><p>Respiratory and liver failure was confirmed by histology and also by a decrease of pressure oxygen in arterial blood (PaO<sub>2</sub>) and increase of bilirubin level after 5 days of CLP. Moreover CLP induced a plasma increase in the level of TNFα, IL-6, IL-10, KC and CCL2 in the first 24<!--> <!-->hours after CLP, but with a progressive decrease at 5 days. On the other hand, our original results show that the level of some of the cytokines in the liver and the lung differ from the systemic level during sepsis. Indeed, there are increase in CCL2 and its receptor CCR2 in the lung compared to the liver, whereas in the liver rather a decrease in the expression of CX3CL1/CX3CR1, that is not altered in the lung. We were also able to highlight a more marked oxidative imbalance in the liver than in the lung. Also, we observed that CLP increases the expression of M1 CD<sub>86</sub> and M2 CD<sub>206</sub> markers in the liver and lung at 5 days, but with a total number of CD<sub>86</sub>-labeled cells, three times greater in the liver.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>These results
{"title":"Identification of immunological biomarkers of macrophages related to specific compartmentalization of in lung and liver in mouse model of septic shock","authors":"A. Bodin , C. Slek , M. Magnin , L. Commin , A. Corlu , V. Lagente , C. Aninat , J.M. Bonnet , B. Allaouchiche , V. Louzier , T. Victoni","doi":"10.1016/j.rmr.2024.01.054","DOIUrl":"https://doi.org/10.1016/j.rmr.2024.01.054","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><p>Sepsis is defined as life-threatening organ dysfunction caused by a dysregulated host response to infection. The complex pathophysiology of sepsis is associated with pro- and anti-inflammatory response, a pro-coagulant state, endothelial dysfunction and tissue hypoxia. These mechanisms lead to progressive multi organ failure. Although this is a systemic process, the pathophysiological of sepsis differs from organ to organ, and from organ to peripheral blood. Our hypothesis to explain this compartmentalization of responses is a distinct population of resident tissue macrophages, as well as a distinct migration of monocytes in target organ. Indeed, the macrophages and monocytes can start the clinical syndrome of sepsis via transcription of genes involved in inflammation. Moreover, macrophages can induce endothelial injury by release reactive oxygen species. Also hypoxia decreases expression of M1 polarization markers and increases the M2 marker. Identification of biomarkers related to specific organs (beyond the blood) will improve the understanding specific organ failure. In this way, the aim of this study was compared to the systemic inflammatory response with the lung and the liver, two organs most affected during sepsis as well as understanding the role of macrophages in this compartmentalization. For this, a murine polymicrobial sepsis model induced by caecal ligation and puncture (CLP) was used.</p></div><div><h3>Methods</h3><p>Moderate sepsis was induced by the CLP in C57BL/6 male mice (<em>n</em> <!-->=<!--> <!-->63), divided into 4 groups: Basal, Sham 1 day and 5 days, CLP 1 days and 5 days. Then, we analyzed histological changes, cytokine profile (by ELISA and PCR), oxidative imbalance (expression of SOD, CAT and iNOS) and polarization markers (CD<sub>86</sub>and CD<sub>206</sub>) by immunohistochemistry.</p></div><div><h3>Results</h3><p>Respiratory and liver failure was confirmed by histology and also by a decrease of pressure oxygen in arterial blood (PaO<sub>2</sub>) and increase of bilirubin level after 5 days of CLP. Moreover CLP induced a plasma increase in the level of TNFα, IL-6, IL-10, KC and CCL2 in the first 24<!--> <!-->hours after CLP, but with a progressive decrease at 5 days. On the other hand, our original results show that the level of some of the cytokines in the liver and the lung differ from the systemic level during sepsis. Indeed, there are increase in CCL2 and its receptor CCR2 in the lung compared to the liver, whereas in the liver rather a decrease in the expression of CX3CL1/CX3CR1, that is not altered in the lung. We were also able to highlight a more marked oxidative imbalance in the liver than in the lung. Also, we observed that CLP increases the expression of M1 CD<sub>86</sub> and M2 CD<sub>206</sub> markers in the liver and lung at 5 days, but with a total number of CD<sub>86</sub>-labeled cells, three times greater in the liver.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>These results","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"41 3","pages":"Pages 207-208"},"PeriodicalIF":0.6,"publicationDate":"2024-03-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"140160440","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2024-03-01DOI: 10.1016/j.rmr.2024.01.060
C. David , D. Brea , A. Cezard , V. Vasseur , E. Barsac , B. Briard , M. Ferreira , S. Adam-Marchand , M. Si-Tahar , A. Guillon
Introduction
Alveolar macrophages (AM) are the first-line lung defenders, but appropriate cell culture models are still limited for their study. The uses of freshly isolated macrophages are hampered by limited quantities or difficult access to human donors. Indeed, research on AM is often restricted to cells differentiated in vitro from bone-marrow progenitors or blood monocytes; however, such cells do not present the specific features of tissue-specialized macrophages, like AM. To overcome these issues, Max Planck Institute (MPI) cells were characterized as a nontransformed, self-renewing AM-like macrophage murine model. Yet, MPI cannot fully reproduce AM characteristics because they developed outside the alveolar niche. To optimize the primary cell cultures of mouse AM (mAM), recent works have proposed strategies to expand and maintain these cells ex vivo from bronchoalveolar lavage (BAL). The functional impact of the amplification process is unclear. Moreover, the heterogeneity of AM population, which is constantly remodeled during the lifespan, is poorly recapitulated in laboratory mice, therefore limiting extrapolation of mAM physiopathology to human. Here, we propose a comprehensive comparison of mice and human AM (hAM) culture models and give insight into the translational value of different mice AM models.
Methods
Ex vivo primary mAM were isolated from BAL of 3–5 mice and expanded for 3–4 weeks per passage. hAM were freshly isolated and maintained from BAL of uninfected patients. Immunophenotypes of MPI, mAM and hAM were compared. We evaluated the cells production of inflammatory mediators (IL-6, TNF-α, IL-1β) in response to different pro-inflammatory agonists such as LPS, poly (I: C), flagellin, Pam3CSK4 and curdlane. We induced cell death using LPS/ATP and measured real-time cell death using IncuCyte SX5 cell-live analysis.
Results
Immunophenotypes of MPI and mAM were comparable despite lower SiglecF and CD11c expression in MPI or mAM after expansion compared to freshly isolated mAM. MPI, mAM and hAM presented similar inflammatory signature but differences in the amplitude of response (exception for Flagellin that induced IL-1-β response in murine models but not in hAM). Overall, MPI had a more pro-inflammatory profile than mAM, as illustrated by a 10-fold production of IL-6 in response to LPS compared to mAM. Differences were observed regarding cell death in mice and human AM models: pyroptotic events were more rapid (1 h) and important in murine AM models compared to hAM.
Conclusion
While clarifying the limits of MPI and ex vivo mAM models, our work showcased consistent inflammatory responses across AM models, albeit with differing response amplitudes. Conversely, mouse and human models exhibited variations in cell death kinetics.
导言肺泡巨噬细胞（AM）是第一线的肺部保卫者，但对其进行研究的合适细胞培养模型仍然有限。由于数量有限或难以获得人类供体，使用新鲜分离的巨噬细胞受到阻碍。事实上，有关AM的研究往往局限于体外从骨髓祖细胞或血液单核细胞分化出来的细胞；然而，这些细胞并不具备组织特化巨噬细胞（如AM）的特征。为了克服这些问题，马克斯-普朗克研究所（MPI）细胞被定性为一种非转化、自我更新的类 AM 巨噬细胞鼠模型。然而，MPI 并不能完全再现 AM 的特征，因为它们是在肺泡龛外发育的。为了优化小鼠AM（mAM）的原代细胞培养，最近的研究提出了从支气管肺泡灌洗液（BAL）中活体扩增和维持这些细胞的策略。目前尚不清楚扩增过程对功能的影响。此外，AM 群体的异质性在生命周期中不断重塑，在实验室小鼠中很难再现，因此限制了将 mAM 的生理病理推断到人类。在此，我们对小鼠和人类 AM（hAM）培养模型进行了全面比较，并深入探讨了不同小鼠 AM 模型的转化价值。比较了 MPI、mAM 和 hAM 的免疫表型。我们评估了细胞在不同促炎激动剂（如 LPS、poly (I:C)、鞭毛蛋白、Pam3CSK4 和 curdlane）作用下产生的炎症介质（IL-6、TNF-α、IL-1β）。我们使用 LPS/ATP 诱导细胞死亡，并使用 IncuCyte SX5 细胞活体分析仪实时测量细胞死亡情况。结果尽管与新鲜分离的 mAM 相比，扩增后的 MPI 或 mAM 中 SiglecF 和 CD11c 表达较低，但 MPI 和 mAM 的免疫表型相当。MPI、mAM和hAM表现出相似的炎症特征，但反应幅度不同（Flagellin除外，它在小鼠模型中诱导IL-1-β反应，但在hAM中没有）。总体而言，MPI 比 mAM 具有更强的促炎特征，这体现在与 mAM 相比，MPI 在应对 LPS 时产生的 IL-6 是 mAM 的 10 倍。在小鼠和人类 AM 模型中观察到了细胞死亡方面的差异：与人类 AM 模型相比，小鼠 AM 模型中的热猝灭事件更快（1 小时），也更重要。相反，小鼠和人类模型在细胞死亡动力学方面表现出差异。
{"title":"Thorough assessment of primary cell cultures for murine and human alveolar macrophages","authors":"C. David , D. Brea , A. Cezard , V. Vasseur , E. Barsac , B. Briard , M. Ferreira , S. Adam-Marchand , M. Si-Tahar , A. Guillon","doi":"10.1016/j.rmr.2024.01.060","DOIUrl":"https://doi.org/10.1016/j.rmr.2024.01.060","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><p>Alveolar macrophages (AM) are the first-line lung defenders, but appropriate cell culture models are still limited for their study. The uses of freshly isolated macrophages are hampered by limited quantities or difficult access to human donors. Indeed, research on AM is often restricted to cells differentiated in vitro from bone-marrow progenitors or blood monocytes; however, such cells do not present the specific features of tissue-specialized macrophages, like AM. To overcome these issues, Max Planck Institute (MPI) cells were characterized as a nontransformed, self-renewing AM-like macrophage murine model. Yet, MPI cannot fully reproduce AM characteristics because they developed outside the alveolar niche. To optimize the primary cell cultures of mouse AM (mAM), recent works have proposed strategies to expand and maintain these cells <em>ex vivo</em> from bronchoalveolar lavage (BAL). The functional impact of the amplification process is unclear. Moreover, the heterogeneity of AM population, which is constantly remodeled during the lifespan, is poorly recapitulated in laboratory mice, therefore limiting extrapolation of mAM physiopathology to human. Here, we propose a comprehensive comparison of mice and human AM (hAM) culture models and give insight into the translational value of different mice AM models.</p></div><div><h3>Methods</h3><p><em>Ex vivo</em> primary mAM were isolated from BAL of 3–5 mice and expanded for 3–4 weeks per passage. hAM were freshly isolated and maintained from BAL of uninfected patients. Immunophenotypes of MPI, mAM and hAM were compared. We evaluated the cells production of inflammatory mediators (IL-6, TNF-α, IL-1β) in response to different pro-inflammatory agonists such as LPS, poly (I: C), flagellin, Pam<sup>3</sup>CSK4 and curdlane. We induced cell death using LPS/ATP and measured real-time cell death using IncuCyte SX5 cell-live analysis.</p></div><div><h3>Results</h3><p>Immunophenotypes of MPI and mAM were comparable despite lower SiglecF and CD<sub>11</sub>c expression in MPI or mAM after expansion compared to freshly isolated mAM. MPI, mAM and hAM presented similar inflammatory signature but differences in the amplitude of response (exception for Flagellin that induced IL-1-β response in murine models but not in hAM). Overall, MPI had a more pro-inflammatory profile than mAM, as illustrated by a 10-fold production of IL-6 in response to LPS compared to mAM. Differences were observed regarding cell death in mice and human AM models: pyroptotic events were more rapid (1<!--> <!-->h) and important in murine AM models compared to hAM.</p></div><div><h3>Conclusion</h3><p>While clarifying the limits of MPI and <em>ex vivo</em> mAM models, our work showcased consistent inflammatory responses across AM models, albeit with differing response amplitudes. Conversely, mouse and human models exhibited variations in cell death kinetics.</p></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"41 3","pages":"Page 211"},"PeriodicalIF":0.6,"publicationDate":"2024-03-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"140160474","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
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