Pub Date : 2025-04-01DOI: 10.1016/j.rmr.2025.02.020
K. El Jekmek , M. Gourmelon , A. Saint-Martin Willer , M. Dutheil , V. Capuano , O. Mercier , D. Montani , F. Antigny
Introduction
Right ventricular failure (RVF) is characterized by the inability of the right ventricle (RV) to maintain adequate blood flow and is the major predictor of mortality in pulmonary arterial hypertension (PAH). PAH is defined by a mean pulmonary arterial pressure greater than 20 mmHg at rest and is characterized by increased pulmonary vascular resistance, leading to right heart failure. Currently, no treatments specifically target RVF in PAH. However, slowing down the progression of RVF could delay the need for double lung transplantation and reduce PAH-related mortality. Loss-of-function mutations in the KCNK3 (Potassium channel subfamily K+ member 3) gene, which encodes the potassium channel known as TASK-1 (TWIK-related acid-sensitive K+ channel 1), have been identified in PAH patients. Our team has recently shown that KCNK3 dysfunction is involved in pulmonary vascular remodeling and contributes to the development of PAH [1]. They also demonstrated that reduced function and expression of KCNK3 is a hallmark of RV hypertrophy and dysfunction associated with pulmonary hypertension [2].
Our objective was to investigate whether the Kcnk3 deficiency exacerbates RV remodeling in a rat model of RV dysfunction induced independently of pulmonary vascular remodeling.
Methods
To address this, we subjected male and female Kcnk3-deficient rats (WT, heterozygous, and homozygous) to chronic RV pressure overload by pulmonary artery banding (PAB). 4 weeks after surgery, we analyzed the consequence of Kcnk3-deficiency on RV remodeling by performing echocardiography, right heart catheterization, and RV histology.
Results
Our results show that rats (males and females) subjected to PAB developed RV hypertrophy and RV dysfunction. In male homozygous Kcnk3-deficient rats, PAB led to an exacerbation of RV hypertrophy, RV dilatation, and a more pronounced increase in RV systolic pressure compared to WT-PAB rats. In contrast, no difference was observed in male heterozygous Kcnk3-deficient rats compared to WT-PAB male rats. Interestingly, RV dysfunction and hypertrophy were unchanged in female homozygous Kcnk3-deficient rats subjected to PAB compared to WT-PAB female rats.
Conclusion
In conclusion, our results suggest that KCNK3 dysfunction is a crucial event in the physiopathology of RV failure. Further studies are needed to understand underlying molecular and cellular mechanisms and to investigate sex differences linked to Kcnk3-deficiency in these experimental conditions.
{"title":"Kcnk3 deficiency aggravates right ventricular dysfunction induced by pulmonary artery banding","authors":"K. El Jekmek , M. Gourmelon , A. Saint-Martin Willer , M. Dutheil , V. Capuano , O. Mercier , D. Montani , F. Antigny","doi":"10.1016/j.rmr.2025.02.020","DOIUrl":"10.1016/j.rmr.2025.02.020","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><div>Right ventricular failure (RVF) is characterized by the inability of the right ventricle (RV) to maintain adequate blood flow and is the major predictor of mortality in pulmonary arterial hypertension (PAH). PAH is defined by a mean pulmonary arterial pressure greater than 20<!--> <!-->mmHg at rest and is characterized by increased pulmonary vascular resistance, leading to right heart failure. Currently, no treatments specifically target RVF in PAH. However, slowing down the progression of RVF could delay the need for double lung transplantation and reduce PAH-related mortality. Loss-of-function mutations in the KCNK3 (Potassium channel subfamily K<sup>+</sup> member 3) gene, which encodes the potassium channel known as TASK-1 (TWIK-related acid-sensitive K<sup>+</sup> channel 1), have been identified in PAH patients. Our team has recently shown that KCNK3 dysfunction is involved in pulmonary vascular remodeling and contributes to the development of PAH <span><span>[1]</span></span>. They also demonstrated that reduced function and expression of KCNK3 is a hallmark of RV hypertrophy and dysfunction associated with pulmonary hypertension <span><span>[2]</span></span>.</div><div>Our objective was to investigate whether the Kcnk3 deficiency exacerbates RV remodeling in a rat model of RV dysfunction induced independently of pulmonary vascular remodeling.</div></div><div><h3>Methods</h3><div>To address this, we subjected male and female Kcnk3-deficient rats (WT, heterozygous, and homozygous) to chronic RV pressure overload by pulmonary artery banding (PAB). 4 weeks after surgery, we analyzed the consequence of Kcnk3-deficiency on RV remodeling by performing echocardiography, right heart catheterization, and RV histology.</div></div><div><h3>Results</h3><div>Our results show that rats (males and females) subjected to PAB developed RV hypertrophy and RV dysfunction. In male homozygous Kcnk3-deficient rats, PAB led to an exacerbation of RV hypertrophy, RV dilatation, and a more pronounced increase in RV systolic pressure compared to WT-PAB rats. In contrast, no difference was observed in male heterozygous Kcnk3-deficient rats compared to WT-PAB male rats. Interestingly, RV dysfunction and hypertrophy were unchanged in female homozygous Kcnk3-deficient rats subjected to PAB compared to WT-PAB female rats.</div></div><div><h3>Conclusion</h3><div>In conclusion, our results suggest that KCNK3 dysfunction is a crucial event in the physiopathology of RV failure. Further studies are needed to understand underlying molecular and cellular mechanisms and to investigate sex differences linked to Kcnk3-deficiency in these experimental conditions.</div></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"42 4","pages":"Pages 191-192"},"PeriodicalIF":0.5,"publicationDate":"2025-04-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"143791498","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2025-04-01DOI: 10.1016/j.rmr.2025.02.026
C. Bourdais , M. Nadaud , A. Coeur , F. Foisset , E. Ahmed , I. Vachier , A. Bourdin , S. Assou , J. De Vos
Primary Ciliary Dyskinesia (PCD) is a genetic disease caused by mutations that alter cilia beating, including in the respiratory airways. This results in poor mucus clearance, severe morbidity, and increased mortality. We hypothesized that bronchial cilia beating can be restored using genetically corrected iPSC differentiated into air - liquid interface bronchial epithelium model (iALI) for autologous cell therapy. We have previously demonstrated that corrected cells derived from a PCD patient iPS line can be differentiated into iALI with functional ciliary beating. The current aim of the project is to evaluate the engraftment potential of these corrected cells and their ability to repair the pathological model post-engraftment. Several key issues need to be addressed identifying competent cells for bronchial engraftment, exploring various strategies to pre-treat the bronchial epithelium, and assessing the recovery of the ciliary beating recovery to assure bronchial repair.
Our team has established the differentiation of iPSCs into iALI. We have generated a PCD patient iPSC line using Sendai viruses, a corresponding CRISPR/Cas9 corrected cell line, as well a wild-type iPSC line and its CRISPR/Cas9 mutated counterpart. We also generated a GFP-iPSC line that expresses the fluorescent GFP protein under the human elongation factor 1 alpha promoter (EF1a), which allows us to track the engraftment of GFP-labeled bronchial stem cells in both control and mutated iALI models. Our results suggest that lung progenitors at the ventralized anterior foregut endoderm stage could be the most efficient cells for engraftment. Their self-renewal capability and ability to differentiate into various cell types of the bronchial epithelium are promising for developing a long-term and effective therapy. Regarding bronchial erosion, we found that promoting cell engraftment is crucial due to the barrier function of the intact bronchial epithelium and the lack of selective advantage of corrected cells. Various chemical and enzymatic strategies have shown potential, but their safety for in-vivo use needs further assessment. Furthermore, GFP-expressing engrafted cells displaying cilia suggest successful differentiation into ciliated cells, though functional recovery still requires confirmation.
In conclusion, the engraftment of corrected lung progenitors into eroded bronchial epithelium appears to be a promising therapeutic strategy to PCD. Next step of the project involves developing this therapy for in-vivo application, assessing its safety and efficacy in an immunodeficient mini-pig model.
{"title":"Combined cellular and gene therapy to treat primary ciliary dyskinesia","authors":"C. Bourdais , M. Nadaud , A. Coeur , F. Foisset , E. Ahmed , I. Vachier , A. Bourdin , S. Assou , J. De Vos","doi":"10.1016/j.rmr.2025.02.026","DOIUrl":"10.1016/j.rmr.2025.02.026","url":null,"abstract":"<div><div>Primary Ciliary Dyskinesia (PCD) is a genetic disease caused by mutations that alter cilia beating, including in the respiratory airways. This results in poor mucus clearance, severe morbidity, and increased mortality. We hypothesized that bronchial cilia beating can be restored using genetically corrected iPSC differentiated into air - liquid interface bronchial epithelium model (iALI) for autologous cell therapy. We have previously demonstrated that corrected cells derived from a PCD patient iPS line can be differentiated into iALI with functional ciliary beating. The current aim of the project is to evaluate the engraftment potential of these corrected cells and their ability to repair the pathological model post-engraftment. Several key issues need to be addressed identifying competent cells for bronchial engraftment, exploring various strategies to pre-treat the bronchial epithelium, and assessing the recovery of the ciliary beating recovery to assure bronchial repair.</div><div>Our team has established the differentiation of iPSCs into iALI. We have generated a PCD patient iPSC line using Sendai viruses, a corresponding CRISPR/Cas9 corrected cell line, as well a wild-type iPSC line and its CRISPR/Cas9 mutated counterpart. We also generated a GFP-iPSC line that expresses the fluorescent GFP protein under the human elongation factor 1 alpha promoter (EF1a), which allows us to track the engraftment of GFP-labeled bronchial stem cells in both control and mutated iALI models. Our results suggest that lung progenitors at the ventralized anterior foregut endoderm stage could be the most efficient cells for engraftment. Their self-renewal capability and ability to differentiate into various cell types of the bronchial epithelium are promising for developing a long-term and effective therapy. Regarding bronchial erosion, we found that promoting cell engraftment is crucial due to the barrier function of the intact bronchial epithelium and the lack of selective advantage of corrected cells. Various chemical and enzymatic strategies have shown potential, but their safety for in-vivo use needs further assessment. Furthermore, GFP-expressing engrafted cells displaying cilia suggest successful differentiation into ciliated cells, though functional recovery still requires confirmation.</div><div>In conclusion, the engraftment of corrected lung progenitors into eroded bronchial epithelium appears to be a promising therapeutic strategy to PCD. Next step of the project involves developing this therapy for in-vivo application, assessing its safety and efficacy in an immunodeficient mini-pig model.</div></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"42 4","pages":"Pages 194-195"},"PeriodicalIF":0.5,"publicationDate":"2025-04-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"143791516","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2025-04-01DOI: 10.1016/j.rmr.2025.02.072
C. Guillois , H. Cazier , E. Guenzi , A. Chassac , P. Mordant , G. Zalcman , A. Mailleux , B. Crestani , A. Cazes , G. Chevreux , N. Poté
Introduction
Pulmonary fibrosis (PF), especially idiopathic pulmonary fibrosis, is associated with a high risk of lung cancer (LC), but the mechanisms of carcinogenesis remains poorly understood. Combining Liquid Chromatography Mass Spectrometry (LC-MS/MS) and Mass Spectrometry Imaging (MSI), we compared the proteome of fibrotic areas from PF tissue samples with and without LC to identify altered signaling pathways.
Methods
34 Formalin Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) surgical samples from patients with PF with LC (LC+, n = 17) and without LC (LC−, n = 17) were included. For each case, a representative FFPE block was selected for downstream analyses. After macrodissection of fibrotic areas, whole protein extracts were analyzed by LC-MS/MS. MSI was performed on tissue section after tryptic digestion, on selected regions of interest within fibrotic areas. In silico tryptic digestion of peptides of interest was further performed, and spatial localization of these peptides was visualized on ion maps.
Results
By LC-MS/MS analysis, we identified 72 out of 4901 proteins significantly differentially expressed between fibrotic areas of LC- and LC+ samples (P < 0.001). Pathway analysis suggested the involvement of oxidative stress metabolism and apoptosis, with significant downregulation of two mitochondrial proteins (BAX, Frataxin), known to activate apoptosis, in fibrotic areas adjacent to LC. After in silico tryptic digestion of BAX protein, MSI analysis revealed at least 2 unique peptides per protein that were significantly underexpressed in LC+ fibrotic areas. Complementary ion map analysis showed a specific expression of these mitochondrial peptides within metaplastic epithelial cells ligning honeycomb cysts.
Conclusion
Using an original proteomic approach integrating LC-MS/MS and MSI, we show that, in patients with PF, fibrotic areas have distinct proteomic profiles depending on the presence of LC. Fibrotic areas adjacent to LC exhibit a significant downregulation of pro-apoptotic mitochondrial proteins. Interestingly, spatial analysis by MSI show that these proteins are expressed by metaplastic epithelial cells within fibrotic areas, suggesting that dysregulation of apoptosis in these cells might be involved in lung carcinogenesis in patients with PF.
肺纤维化（PF），尤其是特发性肺纤维化，与肺癌（LC）的高风险相关，但其致癌机制尚不清楚。结合液相色谱-质谱（LC-MS/MS）和质谱成像（MSI），我们比较了有和没有LC的PF组织样品的纤维化区域的蛋白质组，以确定改变的信号通路。方法选取有LC （LC+, n = 17）和无LC (LC -, n = 17) PF患者的34例福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）手术标本。对于每种情况，选择一个具有代表性的FFPE块进行下游分析。对纤维化区进行宏观解剖后，采用LC-MS/MS分析全蛋白提取物。在胰蛋白酶消化后的组织切片上进行MSI，在纤维化区域内选择感兴趣的区域。在硅胰蛋白酶消化感兴趣的肽进一步进行，并在离子图上可视化这些肽的空间定位。结果通过LC-MS/MS分析，我们鉴定出4901个蛋白中有72个在LC-和LC+样品的纤维化区域中表达显著差异(P <；0.001)。通路分析提示氧化应激代谢与细胞凋亡有关，在LC附近的纤维化区域，两种已知激活细胞凋亡的线粒体蛋白（BAX, Frataxin）显著下调。在对BAX蛋白进行硅胰蛋白酶消化后，MSI分析显示每个蛋白至少有2个独特的肽在LC+纤维化区域显著低表达。互补离子图谱分析显示，这些线粒体肽在连接蜂窝囊肿的化生上皮细胞中特异性表达。通过结合LC-MS/MS和MSI的原始蛋白质组学方法，我们发现，在PF患者中，纤维化区域具有不同的蛋白质组学特征，这取决于LC的存在。LC附近的纤维化区表现出促凋亡线粒体蛋白的显著下调。有趣的是，MSI的空间分析显示，这些蛋白在纤维化区域的化生上皮细胞中表达，这表明这些细胞凋亡的失调可能参与了PF患者的肺癌发生。
{"title":"Proteomic analysis of pulmonary fibrosis associated with lung cancer reveals dysregulation of the apoptotic pathway","authors":"C. Guillois , H. Cazier , E. Guenzi , A. Chassac , P. Mordant , G. Zalcman , A. Mailleux , B. Crestani , A. Cazes , G. Chevreux , N. Poté","doi":"10.1016/j.rmr.2025.02.072","DOIUrl":"10.1016/j.rmr.2025.02.072","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><div>Pulmonary fibrosis (PF), especially idiopathic pulmonary fibrosis, is associated with a high risk of lung cancer (LC), but the mechanisms of carcinogenesis remains poorly understood. Combining Liquid Chromatography Mass Spectrometry (LC-MS/MS) and Mass Spectrometry Imaging (MSI), we compared the proteome of fibrotic areas from PF tissue samples with and without LC to identify altered signaling pathways.</div></div><div><h3>Methods</h3><div>34 Formalin Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) surgical samples from patients with PF with LC (LC+, <em>n</em> <!-->=<!--> <!-->17) and without LC (LC−, <em>n</em> <!-->=<!--> <!-->17) were included. For each case, a representative FFPE block was selected for downstream analyses. After macrodissection of fibrotic areas, whole protein extracts were analyzed by LC-MS/MS. MSI was performed on tissue section after tryptic digestion, on selected regions of interest within fibrotic areas. <em>In silico</em> tryptic digestion of peptides of interest was further performed, and spatial localization of these peptides was visualized on ion maps.</div></div><div><h3>Results</h3><div>By LC-MS/MS analysis, we identified 72 out of 4901 proteins significantly differentially expressed between fibrotic areas of LC- and LC+ samples (<em>P</em> <!--><<!--> <!-->0.001). Pathway analysis suggested the involvement of oxidative stress metabolism and apoptosis, with significant downregulation of two mitochondrial proteins (BAX, Frataxin), known to activate apoptosis, in fibrotic areas adjacent to LC. After <em>in silico</em> tryptic digestion of BAX protein, MSI analysis revealed at least 2 unique peptides per protein that were significantly underexpressed in LC+ fibrotic areas. Complementary ion map analysis showed a specific expression of these mitochondrial peptides within metaplastic epithelial cells ligning honeycomb cysts.</div></div><div><h3>Conclusion</h3><div>Using an original proteomic approach integrating LC-MS/MS and MSI, we show that, in patients with PF, fibrotic areas have distinct proteomic profiles depending on the presence of LC. Fibrotic areas adjacent to LC exhibit a significant downregulation of pro-apoptotic mitochondrial proteins. Interestingly, spatial analysis by MSI show that these proteins are expressed by metaplastic epithelial cells within fibrotic areas, suggesting that dysregulation of apoptosis in these cells might be involved in lung carcinogenesis in patients with PF.</div></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"42 4","pages":"Pages 217-218"},"PeriodicalIF":0.5,"publicationDate":"2025-04-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"143791521","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2025-04-01DOI: 10.1016/j.rmr.2025.02.032
H. Bergereau , D. Hassoun , Q. Marquant , M. Rousselle , A. Magnan , G. Loirand , V. Sauzeau
Introduction
L’asthme est une pathologie chronique caractérisée par une inflammation exacerbée, une hyperréactivité bronchique et un remodelage des voies aériennes. Récemment, nous avons démontré que la GTPase Rac est activée au sein des éosinophiles dans un modèle murin d’asthme sévère. Notre objectif a été d’identifier le rôle de Rac dans la fonction principale des éosinophiles au cours de l’asthme : la dégranulation.
Méthodes
Les cellules progénitrices hématopoïétiques provenant de la moelle osseuse de souris sont mises en culture en présence de Stem Cell Factor (SCF) et de Fms-Like Tyrosine kinase 3 (FLT3-L) pour induire leur expansion. Au 4e jour de culture, l’ajout d’interleukine 5 permet la différenciation des cellules progénitrices en éosinophiles. In vitro, la dégranulation des éosinophiles est induite par le Platelet Activating Factor (PAF). Le trafic des granules de sécrétion a été analysé par immunofluorescence et par microscopie électronique. Les voies de signalisation intracellulaire ont été analysées par western-blot.
Résultats
Nous avons observé que le traitement des éosinophiles au PAF induit une libération d’éosinophile peroxydase (EPX) mais également une activation de la protéine Rac. L’inhibition pharmacologique de Rac (A41, 10-5 M) prévient la libération d’EPX des éosinophiles murins et également des éosinophiles humains. Par immunofluorescence et microscopie électronique, nous avons observé que l’activation de Rac par le PAF joue un rôle majeur dans la migration des granules de sécrétion du cytoplasme vers la membrane plasmique des éosinophiles, aboutissant à la libération des médiateurs cytotoxiques. Par une approche biochimique, nous avons démontré que l’activation de Rac par le PAF favorise la formation du complexe protéique Rac/PLCß2 (phospholipase C ß2) permettant la production d’IP3 et ainsi l’augmentation de la concentration calcique intracellulaire nécessaire à la dégranulation. Pour valider in vivo le rôle de Rac dans les éosinophiles, nous avons développé un modèle expérimental d’asthme sévère allergique. Nous avons observé que la libération d’EPX par les cellules inflammatoires présentes dans les poumons des souris asthmatiques est inhibée par l’A41.
Conclusions
Nos résultats démontrent que la dégranulation des éosinophiles induite par le PAF au cours de l’asthme est dépendante de l’activation de Rac. Ainsi, la GTPase apparaît comme une nouvelle cible thérapeutique d’intérêt pour lutter contre l’inflammation au cours de l’asthme allergique.
{"title":"Impact de l’activation de la GTPase Rac dans la dégranulation des éosinophiles au cours de l’asthme sévère","authors":"H. Bergereau , D. Hassoun , Q. Marquant , M. Rousselle , A. Magnan , G. Loirand , V. Sauzeau","doi":"10.1016/j.rmr.2025.02.032","DOIUrl":"10.1016/j.rmr.2025.02.032","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><div>L’asthme est une pathologie chronique caractérisée par une inflammation exacerbée, une hyperréactivité bronchique et un remodelage des voies aériennes. Récemment, nous avons démontré que la GTPase Rac est activée au sein des éosinophiles dans un modèle murin d’asthme sévère. Notre objectif a été d’identifier le rôle de Rac dans la fonction principale des éosinophiles au cours de l’asthme : la dégranulation.</div></div><div><h3>Méthodes</h3><div>Les cellules progénitrices hématopoïétiques provenant de la moelle osseuse de souris sont mises en culture en présence de Stem Cell Factor (SCF) et de Fms-Like Tyrosine kinase 3 (FLT3-L) pour induire leur expansion. Au 4<sup>e</sup> jour de culture, l’ajout d’interleukine 5 permet la différenciation des cellules progénitrices en éosinophiles. In vitro, la dégranulation des éosinophiles est induite par le Platelet Activating Factor (PAF). Le trafic des granules de sécrétion a été analysé par immunofluorescence et par microscopie électronique. Les voies de signalisation intracellulaire ont été analysées par western-blot.</div></div><div><h3>Résultats</h3><div>Nous avons observé que le traitement des éosinophiles au PAF induit une libération d’éosinophile peroxydase (EPX) mais également une activation de la protéine Rac. L’inhibition pharmacologique de Rac (A41, 10-5<!--> <!-->M) prévient la libération d’EPX des éosinophiles murins et également des éosinophiles humains. Par immunofluorescence et microscopie électronique, nous avons observé que l’activation de Rac par le PAF joue un rôle majeur dans la migration des granules de sécrétion du cytoplasme vers la membrane plasmique des éosinophiles, aboutissant à la libération des médiateurs cytotoxiques. Par une approche biochimique, nous avons démontré que l’activation de Rac par le PAF favorise la formation du complexe protéique Rac/PLCß2 (phospholipase<!--> <!-->C ß2) permettant la production d’IP3 et ainsi l’augmentation de la concentration calcique intracellulaire nécessaire à la dégranulation. Pour valider in vivo le rôle de Rac dans les éosinophiles, nous avons développé un modèle expérimental d’asthme sévère allergique. Nous avons observé que la libération d’EPX par les cellules inflammatoires présentes dans les poumons des souris asthmatiques est inhibée par l’A41.</div></div><div><h3>Conclusions</h3><div>Nos résultats démontrent que la dégranulation des éosinophiles induite par le PAF au cours de l’asthme est dépendante de l’activation de Rac. Ainsi, la GTPase apparaît comme une nouvelle cible thérapeutique d’intérêt pour lutter contre l’inflammation au cours de l’asthme allergique.</div></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"42 4","pages":"Pages 197-198"},"PeriodicalIF":0.5,"publicationDate":"2025-04-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"143791452","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2025-04-01DOI: 10.1016/j.rmr.2025.02.021
A. Leriche , A. Gaubert , C. Guibert , T. Ducret , JF. Quignard
Introduction
L’hypertension pulmonaire est une pathologie caractérisée par un remodelage important des artères intra-pulmonaires ayant pour conséquence d’augmenter le travail cardiaque conduisant à la mort. Dans cette pathologie, les contraintes mécaniques exercées sur les cellules musculaires lisses vasculaires sont modifiées. Ces contraintes mécaniques sont perçues par des canaux ioniques membranaires mécano-sensibles tels que Piezo1 qui convertissent les différents stimuli mécaniques en influx calcique et en réponses biologiques. La rigidité de la matrice extracellulaire est une contrainte mécanique majeure et elle augmente au cours de la pathologie. Nous avons investigué les effets de la rigidité matricielle sur l’activité de Piezo1.
Méthodes
Des cellules musculaires lisses d’artères intra-pulmonaires ont été cultivées sur des hydrogels Bola Bis Urée (BBU) de différentes rigidités (1 à 10 KPa). Cette matrice synthétique ne contient pas de protéines pouvant interagir avec des récepteurs membranaires. La concentration calcique intracellulaire et le potentiel transmembranaire ont été mesurés grâce aux sondes fluorescentes Cal520® et FLIPR®. La prolifération cellulaire a été estimé avec CyQUANT®.
Résultats
Une forte rigidité matricielle (10 kPa) augmente l’expression de Piezo1. Elle induit une diminution l’amplitude et un ralentissement de la cinétique des signaux calciques intracellulaires après stimulation de Piezo1 par son agoniste Yoda1. Par contre, cette forte rigidité augmente l’activité basale de Piezo1 induisant une augmentation de la concentration calcique intracellulaire basale. Elle induit aussi une dépolarisation cellulaire liée à Piezo1. L’augmentation de la rigidité induit une augmentation de la prolifération cellulaire mais qui est indépendante de Piezo1.
Conclusion
Ainsi la rigidité matricielle pourrait jouer un rôle de stimulus mécanique sur Piezo1 entraînant une altération de son activité en adéquation avec le contexte d’hypertension pulmonaire.
肺动脉高压是一种以肺内动脉严重重塑为特征的疾病，导致心脏工作增加，导致死亡。在这种病理中，对平滑肌细胞施加的机械应力发生了变化。这些机械应力由机械敏感的膜离子通道感知，如压电1，它将各种机械刺激转化为钙流入和生物反应。细胞外基质的刚性是一个主要的机械约束，并在病理过程中增加。我们研究了矩阵刚度对压电活性的影响。方法在不同硬度（1 - 10KPa）的Bola Bis Uree水凝胶（BBU）上培养肺内动脉平滑肌细胞。这种合成基质不含能与膜受体相互作用的蛋白质。使用荧光探针Cal520®和FLIPR®测量细胞内钙浓度和跨膜电位。使用CyQUANT®估计细胞增殖。结果：高基质刚度（10kPa）增加压电1的表达。在Piezo1被其激动剂Yoda1刺激后，它会导致细胞内钙信号的振幅降低和动力学减慢。然而，这种高刚性增加了Piezo1的碱性活性，导致碱性细胞内钙浓度的增加。它还诱导与压电1相关的细胞去极化。刚度的增加导致细胞增殖的增加，但这与压电无关。因此，基质刚度可能对压电1起到机械刺激的作用，导致其活性的改变，与肺动脉高压的背景相适应。
{"title":"Impact de la matrice extracellulaire sur le canal mécanosensible PIEZO1 dans les cellules musculaires lisses pulmonaires","authors":"A. Leriche , A. Gaubert , C. Guibert , T. Ducret , JF. Quignard","doi":"10.1016/j.rmr.2025.02.021","DOIUrl":"10.1016/j.rmr.2025.02.021","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><div>L’hypertension pulmonaire est une pathologie caractérisée par un remodelage important des artères intra-pulmonaires ayant pour conséquence d’augmenter le travail cardiaque conduisant à la mort. Dans cette pathologie, les contraintes mécaniques exercées sur les cellules musculaires lisses vasculaires sont modifiées. Ces contraintes mécaniques sont perçues par des canaux ioniques membranaires mécano-sensibles tels que Piezo1 qui convertissent les différents stimuli mécaniques en influx calcique et en réponses biologiques. La rigidité de la matrice extracellulaire est une contrainte mécanique majeure et elle augmente au cours de la pathologie. Nous avons investigué les effets de la rigidité matricielle sur l’activité de Piezo1.</div></div><div><h3>Méthodes</h3><div>Des cellules musculaires lisses d’artères intra-pulmonaires ont été cultivées sur des hydrogels Bola Bis Urée (BBU) de différentes rigidités (1 à 10 KPa). Cette matrice synthétique ne contient pas de protéines pouvant interagir avec des récepteurs membranaires. La concentration calcique intracellulaire et le potentiel transmembranaire ont été mesurés grâce aux sondes fluorescentes Cal520® et FLIPR®. La prolifération cellulaire a été estimé avec CyQUANT®.</div></div><div><h3>Résultats</h3><div>Une forte rigidité matricielle (10<!--> <!-->kPa) augmente l’expression de Piezo1. Elle induit une diminution l’amplitude et un ralentissement de la cinétique des signaux calciques intracellulaires après stimulation de Piezo1 par son agoniste Yoda1. Par contre, cette forte rigidité augmente l’activité basale de Piezo1 induisant une augmentation de la concentration calcique intracellulaire basale. Elle induit aussi une dépolarisation cellulaire liée à Piezo1. L’augmentation de la rigidité induit une augmentation de la prolifération cellulaire mais qui est indépendante de Piezo1.</div></div><div><h3>Conclusion</h3><div>Ainsi la rigidité matricielle pourrait jouer un rôle de stimulus mécanique sur Piezo1 entraînant une altération de son activité en adéquation avec le contexte d’hypertension pulmonaire.</div></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"42 4","pages":"Page 192"},"PeriodicalIF":0.5,"publicationDate":"2025-04-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"143791499","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2025-04-01DOI: 10.1016/j.rmr.2025.02.075
Y. Bertrand , T. Planté-Bordeneuve , L. Schmit , M. Lecocq , C. Pilette , A. Froidure
Introduction
La fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) est une pathologie interstitielle sévère, caractérisée par un remodelage hétérogène du tissu pulmonaire distal. Il a été observé que des agrégats lymphoïdes s’accumulaient dans le tissu fibreux mais également que les taux élevés d’IgA, ainsi que de facteur d’activation des lymphocytes B (BAFF) dans le sérum des patients étaient corrélés à une baisse de la survie. De plus, des auto-anticorps circulants dirigés contre des cibles variées ont été identifiés dans le sérum et le lavage bronchoalvéolaire (LBA) des patients FPI. Toutefois, à l’heure actuelle, l’activation locale des lymphocytes B (LyB), leur distribution et leur environnement restent encore à caractériser dans la FPI.
Méthodes
Des immunomarquages sur des lames FFPE de biopsies et d’explants FPI ont été réalisés pour marquer l’IgA, BAFF, CD 19, XBP1, proSP-C, et Krt5. Un dosage de BAFF et APRIL a été effectué dans le LBA et le sérum d’individus FPI et contrôles. Des tests d’immunofluorescence HEp2 ont été réalisés dans les LBA des mêmes individus pour évaluer la présence d’anticorps auto-réactifs d’isotype IgA.
Résultats
Les agrégats de lymphocytes B sont observables dans les régions remodelées du parenchyme pulmonaire. On observe que les lymphocytes B sont présents non seulement dans ces agrégats mais également à un niveau sub-épithélial, à proximité de structures ectopiques (proSP-C+ et Krt5+). Un marquage modéré de BAFF est visible au niveau de ces structures. Toutefois, l’on ne détecte pas de différence dans les taux circulants de BAFF ni d’APRIL entre les individus FPI et contrôle. On n’observe pas non plus de différence significative entre l’intensité de la fluorescence des HEp2 entre ces deux groupes. L’intensité de la fluorescence des anticorps auto-réactifs corrèle avec le taux d’APRIL dans le LBA des individus FPI.
Conclusion
Cette étude met en évidence plusieurs localisations des lymphocytes B au sein du tissu remodelé. On observe non seulement leur présence dans les agrégats lymphoïdes mais également sous les structures épithéliales ectopiques. Ces structures sont également positivement marquées pour BAFF, ce qui suggère une potentielle stimulation de la production d’anticorps ainsi qu’un class-switch favorisé localement vers l’IgA. Dans les LBA, on observe la présence d’auto-anticorps dont les taux corrèlent avec ceux de APRIL. Ces résultats suggèrent que, pour une sous-population de patients, une suractivation locale des lymphocytes B avec une production d’auto-anticorps serait déjà présente au moment du diagnostic.
{"title":"Activation locale des lymphocytes B dans la fibrose pulmonaire idiopathique","authors":"Y. Bertrand , T. Planté-Bordeneuve , L. Schmit , M. Lecocq , C. Pilette , A. Froidure","doi":"10.1016/j.rmr.2025.02.075","DOIUrl":"10.1016/j.rmr.2025.02.075","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><div>La fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) est une pathologie interstitielle sévère, caractérisée par un remodelage hétérogène du tissu pulmonaire distal. Il a été observé que des agrégats lymphoïdes s’accumulaient dans le tissu fibreux mais également que les taux élevés d’IgA, ainsi que de facteur d’activation des lymphocytes B (BAFF) dans le sérum des patients étaient corrélés à une baisse de la survie. De plus, des auto-anticorps circulants dirigés contre des cibles variées ont été identifiés dans le sérum et le lavage bronchoalvéolaire (LBA) des patients FPI. Toutefois, à l’heure actuelle, l’activation locale des lymphocytes B (LyB), leur distribution et leur environnement restent encore à caractériser dans la FPI.</div></div><div><h3>Méthodes</h3><div>Des immunomarquages sur des lames FFPE de biopsies et d’explants FPI ont été réalisés pour marquer l’IgA, BAFF, CD 19, XBP1, proSP-C, et Krt5. Un dosage de BAFF et APRIL a été effectué dans le LBA et le sérum d’individus FPI et contrôles. Des tests d’immunofluorescence HEp2 ont été réalisés dans les LBA des mêmes individus pour évaluer la présence d’anticorps auto-réactifs d’isotype IgA.</div></div><div><h3>Résultats</h3><div>Les agrégats de lymphocytes B sont observables dans les régions remodelées du parenchyme pulmonaire. On observe que les lymphocytes B sont présents non seulement dans ces agrégats mais également à un niveau sub-épithélial, à proximité de structures ectopiques (proSP-C<sup>+</sup> et Krt5<sup>+</sup>). Un marquage modéré de BAFF est visible au niveau de ces structures. Toutefois, l’on ne détecte pas de différence dans les taux circulants de BAFF ni d’APRIL entre les individus FPI et contrôle. On n’observe pas non plus de différence significative entre l’intensité de la fluorescence des HEp2 entre ces deux groupes. L’intensité de la fluorescence des anticorps auto-réactifs corrèle avec le taux d’APRIL dans le LBA des individus FPI.</div></div><div><h3>Conclusion</h3><div>Cette étude met en évidence plusieurs localisations des lymphocytes B au sein du tissu remodelé. On observe non seulement leur présence dans les agrégats lymphoïdes mais également sous les structures épithéliales ectopiques. Ces structures sont également positivement marquées pour BAFF, ce qui suggère une potentielle stimulation de la production d’anticorps ainsi qu’un class-switch favorisé localement vers l’IgA. Dans les LBA, on observe la présence d’auto-anticorps dont les taux corrèlent avec ceux de APRIL. Ces résultats suggèrent que, pour une sous-population de patients, une suractivation locale des lymphocytes B avec une production d’auto-anticorps serait déjà présente au moment du diagnostic.</div></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"42 4","pages":"Page 219"},"PeriodicalIF":0.5,"publicationDate":"2025-04-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"143791534","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2025-04-01DOI: 10.1016/j.rmr.2025.02.016
R. Lopes Gonçalves , M. Gautier , J. Mille , L. Guardini , L.-E. Zaragosi , M. Ben Kheder , H. Groux , B. Mari , R. Rezzonico , G. Vassaux
Introduction
The aim of this project is to determine whether single-cell transcriptomics (sc-RNAseq) can provide information susceptible to enrich classical bulk transcriptomics experiments in toxicology. In the present work, we studied the effects of a non-genotoxic carcinogen (CdCl2) on human airway pseudostratified epithelium.
Methods
The identification of cell-type-specific gene expression signatures was performed through scRNA-seq analyses using PARSE technology on human airway bronchial epithelial cells (HAEC) cultured in 3D at an air-liquid interface (ALI) and exposed to 10 μM CdCl2, an heavy metal pollutant present in cigarette smoke. These cell-type specific responses signatures were validated through RNA-Fluorescence In Situ Hybridizations.
Results
Single-cell gene profiling indicated that different regulons are modulated in a cell-type-specific manner in response to CdCl2 exposure. For instance, we showed that treatment with CdCl2 stimulated the expression of MT1G, MT1 M and to a lesser extent SLC30A1 and HMOX1 preferentially in multiciliated and mucus-secreting cells, while AKT3 and IL1RN are rather induced in basal cells. Among the cadmium-regulated genes, we found that the long non-coding RNA LUCAT1 is induced in specific differentiated cell types. We previously showed1 that LUCAT1 is i) upregulated by hypoxia in lung adenocarcinomas, ii) correlated with poor prognosis in patients and iii) involved in the regulation of oxidative stress in cancer cells. However, its cellular sourcing and physiological role in the differentiated mucociliary airway epithelium have not yet been addressed. We found that LUCAT1 is slightly expressed in the untreated epithelium, but in response to hypoxia or CdCl2, it is markedly induced in suprabasal and deuterosomal cells and in differentiated secretory and multiciliated cells but not in basal cells. Using a CRISPR-Cas9-RNP approach2 to knockdown LUCAT1 in basal bronchial stem cells, we will decipher the cell state-specific functions of this gene i) in the regeneration steps of a fully differentiated mucociliary human airway epithelium and, ii) in hypoxia- and CdCl2-responses.
Conclusion
ScRNA-seq reveals distinct transcriptional responses to CdCl2 among airway epithelial cell subtypes. This method could be applied to other molecules to classify gene expression variations and develop predictive tests for non-genotoxic carcinogens compounds. This study also precise the physiological role of LUCAT1 in the homeostasis, regeneration and stress-response of HAEC.
{"title":"Single-cell transcriptomics identify cell-type specific transcriptomic signatures in response to CdCl2 in human airway bronchial epithelial cells cultured at the air-liquid interface","authors":"R. Lopes Gonçalves , M. Gautier , J. Mille , L. Guardini , L.-E. Zaragosi , M. Ben Kheder , H. Groux , B. Mari , R. Rezzonico , G. Vassaux","doi":"10.1016/j.rmr.2025.02.016","DOIUrl":"10.1016/j.rmr.2025.02.016","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><div>The aim of this project is to determine whether single-cell transcriptomics (sc-RNAseq) can provide information susceptible to enrich classical bulk transcriptomics experiments in toxicology. In the present work, we studied the effects of a non-genotoxic carcinogen (CdCl2) on human airway pseudostratified epithelium.</div></div><div><h3>Methods</h3><div>The identification of cell-type-specific gene expression signatures was performed through scRNA-seq analyses using PARSE technology on human airway bronchial epithelial cells (HAEC) cultured in 3D at an air-liquid interface (ALI) and exposed to 10<!--> <!-->μM CdCl2, an heavy metal pollutant present in cigarette smoke. These cell-type specific responses signatures were validated through RNA-Fluorescence In Situ Hybridizations.</div></div><div><h3>Results</h3><div>Single-cell gene profiling indicated that different regulons are modulated in a cell-type-specific manner in response to CdCl2 exposure. For instance, we showed that treatment with CdCl2 stimulated the expression of MT1G, MT1<!--> <!-->M and to a lesser extent SLC30A1 and HMOX1 preferentially in multiciliated and mucus-secreting cells, while AKT3 and IL1RN are rather induced in basal cells. Among the cadmium-regulated genes, we found that the long non-coding RNA LUCAT1 is induced in specific differentiated cell types. We previously showed1 that LUCAT1 is i) upregulated by hypoxia in lung adenocarcinomas, ii) correlated with poor prognosis in patients and iii) involved in the regulation of oxidative stress in cancer cells. However, its cellular sourcing and physiological role in the differentiated mucociliary airway epithelium have not yet been addressed. We found that LUCAT1 is slightly expressed in the untreated epithelium, but in response to hypoxia or CdCl2, it is markedly induced in suprabasal and deuterosomal cells and in differentiated secretory and multiciliated cells but not in basal cells. Using a CRISPR-Cas9-RNP approach2 to knockdown LUCAT1 in basal bronchial stem cells, we will decipher the cell state-specific functions of this gene i) in the regeneration steps of a fully differentiated mucociliary human airway epithelium and, ii) in hypoxia- and CdCl2-responses.</div></div><div><h3>Conclusion</h3><div>ScRNA-seq reveals distinct transcriptional responses to CdCl2 among airway epithelial cell subtypes. This method could be applied to other molecules to classify gene expression variations and develop predictive tests for non-genotoxic carcinogens compounds. This study also precise the physiological role of LUCAT1 in the homeostasis, regeneration and stress-response of HAEC.</div></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"42 4","pages":"Page 189"},"PeriodicalIF":0.5,"publicationDate":"2025-04-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"143791599","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2025-04-01DOI: 10.1016/j.rmr.2025.02.028
J. Mercier , J. Issard , P. Mordant , G. Fadel , MR. Ghigha , E. Fadel , F. Antigny , O. Mercier
Introduction
Ex vivo lung perfusion (EVLP) is a preservation technique that allows the evaluation and reconditioning of marginal donor grafts, thereby expanding the donor pool. However, EVLP is currently limited to 6 hours in clinical practice and at least 30 % of grafts fail to meet transplantation criteria at the end of perfusion period [1]. Today, EVLP is mainly used to assess lung function before lung transplantation rather than to recondition damaged lungs. We aim to prolong the duration of EVLP as this would allow the application of therapies and potentially increase the number of lungs available for transplantation. We hypothesize that maintaining pH, electrolytes, and glucose levels in the perfusate would allow EVLP for more than 6 hours while preserving organ integrity. Thus, we investigated the effect of a perfusate correcting solution during a 12-hour EVLP in a porcine model.
Methods
Twelve porcine lung blocks were collected and cold-preserved prior to 12 hours of normothermic EVLP. The lung blocks were allocated equally into two groups, according to the perfusate solution. All lung blocks were perfused with STEEN solution™, 100 mL of which was replaced every two hours with either fresh STEEN solution™ (standard group, n = 6) or a modified solution (1/3 STEEN solution™, 1/3 glucose solution [2.5 %], 1/3 sodium bicarbonate solution [14 mg/mL]) designed to correct the perfusate composition (corrected group, n = 6). Perfusate electrolytes, glucose, cytokines, pH, partial oxygen pressure (PO2), pulmonary vascular resistance (PVR), and compliance were measured. After the EVLP period, the left lungs were transplanted into donor-related pigs. The right lungs were used for histology and electron microscopy.
Results
During EVLP, perfusate correction succeeded in maintaining electrolyte and pH, within physiological ranges. However, glycemia increased at a higher level than expected. Higher density of Kohn's pores, as well as less edema and more hyaline membranes, were observed in the corrected group after EVLP. Lung compliance and oxygenation tend to be higher in the corrected group without reaching significance. PVR was similar in both groups, and no significant difference was observed in ΔPO2 between groups after transplantation.
Conclusion
We succeeded in correcting perfusate electrolytes levels and pH, but not maintaining glycemia in physiological ranges. In these conditions, no benefit was clearly demonstrated in the corrected group, while some histological changes occured. Further studies are needed to properly correct perfusate composition and maintain glucose levels within physiological ranges. Thus, the effect of an efficient perfusate composition correction on the duration of EVLP remains unknown
{"title":"Evaluation of perfusate composition correction during 12-hour ex-vivo lung perfusion in swine","authors":"J. Mercier , J. Issard , P. Mordant , G. Fadel , MR. Ghigha , E. Fadel , F. Antigny , O. Mercier","doi":"10.1016/j.rmr.2025.02.028","DOIUrl":"10.1016/j.rmr.2025.02.028","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><div>Ex vivo lung perfusion (EVLP) is a preservation technique that allows the evaluation and reconditioning of marginal donor grafts, thereby expanding the donor pool. However, EVLP is currently limited to 6<!--> <!-->hours in clinical practice and at least 30 % of grafts fail to meet transplantation criteria at the end of perfusion period <span><span>[1]</span></span>. Today, EVLP is mainly used to assess lung function before lung transplantation rather than to recondition damaged lungs. We aim to prolong the duration of EVLP as this would allow the application of therapies and potentially increase the number of lungs available for transplantation. We hypothesize that maintaining pH, electrolytes, and glucose levels in the perfusate would allow EVLP for more than 6<!--> <!-->hours while preserving organ integrity. Thus, we investigated the effect of a perfusate correcting solution during a 12-hour EVLP in a porcine model.</div></div><div><h3>Methods</h3><div>Twelve porcine lung blocks were collected and cold-preserved prior to 12<!--> <!-->hours of normothermic EVLP. The lung blocks were allocated equally into two groups, according to the perfusate solution. All lung blocks were perfused with STEEN solution™, 100<!--> <!-->mL of which was replaced every two hours with either fresh STEEN solution™ (standard group, n<!--> <!-->=<!--> <!-->6) or a modified solution (1/3 STEEN solution™, 1/3 glucose solution [2.5 %], 1/3 sodium bicarbonate solution [14<!--> <!-->mg/mL]) designed to correct the perfusate composition (corrected group, n<!--> <!-->=<!--> <!-->6). Perfusate electrolytes, glucose, cytokines, pH, partial oxygen pressure (PO<sub>2</sub>), pulmonary vascular resistance (PVR), and compliance were measured. After the EVLP period, the left lungs were transplanted into donor-related pigs. The right lungs were used for histology and electron microscopy.</div></div><div><h3>Results</h3><div>During EVLP, perfusate correction succeeded in maintaining electrolyte and pH, within physiological ranges. However, glycemia increased at a higher level than expected. Higher density of Kohn's pores, as well as less edema and more hyaline membranes, were observed in the corrected group after EVLP. Lung compliance and oxygenation tend to be higher in the corrected group without reaching significance. PVR was similar in both groups, and no significant difference was observed in ΔPO<sub>2</sub> between groups after transplantation.</div></div><div><h3>Conclusion</h3><div>We succeeded in correcting perfusate electrolytes levels and pH, but not maintaining glycemia in physiological ranges. In these conditions, no benefit was clearly demonstrated in the corrected group, while some histological changes occured. Further studies are needed to properly correct perfusate composition and maintain glucose levels within physiological ranges. Thus, the effect of an efficient perfusate composition correction on the duration of EVLP remains unknown ","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"42 4","pages":"Pages 195-196"},"PeriodicalIF":0.5,"publicationDate":"2025-04-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"143791448","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
Pub Date : 2025-04-01DOI: 10.1016/j.rmr.2025.02.029
M. Leveque , S. Corgnac , O. Mercier , E. Fadel , G. Dauriat , P. Pradere , M. Phayanouvong , J. Le Pavec , J. Adam
Introduction
L’implication de l’immunité innée dans la toxicité du greffon pulmonaire est de mieux en mieux identifiée. Les lymphocytes Natural Killer (LNK) semblent associés à l’apparition de lésions du greffon, leur concentration étant plus élevée dans le liquide broncho-alvéolaire en cas de rejet aigu (RA) [1], et leur nombre plus important dans le tissu pulmonaire en cas de dysfonction chronique du greffon [2]. Cette étude vise à examiner rôle des LNK dans le RA de greffe pulmonaire.
Méthodes
Des techniques d’immunohistochimie (IHC) et immunofluorescence (IF) multiplex ont été réalisées sur des biopsies transbronchiques (BTB) qui avaient été prélevées en contexte de dysfonction aigue du greffon attribuée à un RA, prouvé histologiquement ou non, lors de la première année post-transplantation des patients greffés pulmonaire entre 2012 et 2022 au sein de l’Hôpital Marie Lannelongue. Les LNK ont été identifiés par l’expression de CD56 et NKp46 et les lymphocytes B et T par l’expression de CD20 et CD3 respectivement.
Résultats
63 BTB ont pu être analysées. Les anticorps utilisés ont permis l’identification de LNK au sein des biopsies. Le coefficient de corrélation entre les marqueurs CD56 et NKp46 était de 0,45 (p < 0,001). La densité en cellules NKp46+ était en moyenne de 16,36 cellules/mm2 sur l’ensemble des BTB, avec une moyenne plus élevée dans le groupe RA humoral comparativement aux autres types de RA. Lorsqu’un un infiltrat lymphocytaire était identifié, la majorité des cellules NKp46+ étaient localisées en son sein pour plus de 50 % des cas.
Conclusion
L’identification des LNK dans les BTB de patients avec RA de greffe pulmonaire a été possible grâce aux techniques d’IHC et d’IF. Leur répartition tissulaire semble suivre celle des autres populations lymphocytaires. Conformément à leur distribution, leur implication semble plus marquée dans les RA humoraux, mais cette observation nécessite confirmation par des études supplémentaires.
{"title":"Étude du rejet médié par les lymphocytes natural Killer en transplantation pulmonaire","authors":"M. Leveque , S. Corgnac , O. Mercier , E. Fadel , G. Dauriat , P. Pradere , M. Phayanouvong , J. Le Pavec , J. Adam","doi":"10.1016/j.rmr.2025.02.029","DOIUrl":"10.1016/j.rmr.2025.02.029","url":null,"abstract":"<div><h3>Introduction</h3><div>L’implication de l’immunité innée dans la toxicité du greffon pulmonaire est de mieux en mieux identifiée. Les lymphocytes Natural Killer (LNK) semblent associés à l’apparition de lésions du greffon, leur concentration étant plus élevée dans le liquide broncho-alvéolaire en cas de rejet aigu (RA) <span><span>[1]</span></span>, et leur nombre plus important dans le tissu pulmonaire en cas de dysfonction chronique du greffon <span><span>[2]</span></span>. Cette étude vise à examiner rôle des LNK dans le RA de greffe pulmonaire.</div></div><div><h3>Méthodes</h3><div>Des techniques d’immunohistochimie (IHC) et immunofluorescence (IF) multiplex ont été réalisées sur des biopsies transbronchiques (BTB) qui avaient été prélevées en contexte de dysfonction aigue du greffon attribuée à un RA, prouvé histologiquement ou non, lors de la première année post-transplantation des patients greffés pulmonaire entre 2012 et 2022 au sein de l’Hôpital Marie Lannelongue. Les LNK ont été identifiés par l’expression de CD<sub>56</sub> et NKp46 et les lymphocytes B et T par l’expression de CD<sub>20</sub> et CD<sub>3</sub> respectivement.</div></div><div><h3>Résultats</h3><div>63 BTB ont pu être analysées. Les anticorps utilisés ont permis l’identification de LNK au sein des biopsies. Le coefficient de corrélation entre les marqueurs CD<sub>56</sub> et NKp46 était de 0,45 (<em>p</em> < 0,001). La densité en cellules NKp46+ était en moyenne de 16,36 cellules/mm<sup>2</sup> sur l’ensemble des BTB, avec une moyenne plus élevée dans le groupe RA humoral comparativement aux autres types de RA. Lorsqu’un un infiltrat lymphocytaire était identifié, la majorité des cellules NKp46+ étaient localisées en son sein pour plus de 50 % des cas.</div></div><div><h3>Conclusion</h3><div>L’identification des LNK dans les BTB de patients avec RA de greffe pulmonaire a été possible grâce aux techniques d’IHC et d’IF. Leur répartition tissulaire semble suivre celle des autres populations lymphocytaires. Conformément à leur distribution, leur implication semble plus marquée dans les RA humoraux, mais cette observation nécessite confirmation par des études supplémentaires.</div></div>","PeriodicalId":21548,"journal":{"name":"Revue des maladies respiratoires","volume":"42 4","pages":"Page 196"},"PeriodicalIF":0.5,"publicationDate":"2025-04-01","publicationTypes":"Journal Article","fieldsOfStudy":null,"isOpenAccess":false,"openAccessPdf":"","citationCount":null,"resultStr":null,"platform":"Semanticscholar","paperid":"143791449","PeriodicalName":null,"FirstCategoryId":null,"ListUrlMain":null,"RegionNum":4,"RegionCategory":"医学","ArticlePicture":[],"TitleCN":null,"AbstractTextCN":null,"PMCID":"","EPubDate":null,"PubModel":null,"JCR":null,"JCRName":null,"Score":null,"Total":0}
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